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運用流式細胞儀計數(shù)細胞應注意的問題

2013-6-30　　閱讀(1611)

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運用流式細胞儀計數(shù)細胞應注意的問題

制作組織勻漿或細胞懸液，用熒光染料染色，則可以用流式細胞儀計數(shù)不同DNA含量或倍數(shù)的細胞數(shù)。例如，在睪丸組織中，精子細胞為單倍體細胞，精原細胞、Sertoli細胞、Leydig細胞和其他非生精細胞為雙倍體細胞，初級精母細胞以及處于分裂期的精原細胞和非生精細胞為四倍體細胞。因此，運用流式細胞儀測定睪丸組織各級生精細胞DNA倍體的變化，可以間接判斷不同生精細胞數(shù)目相對比例變化的趨勢。但是，利用這些結(jié)果得出結(jié)論時一定要謹慎。例如，單倍體細胞數(shù)所占百分比下降可能說明精子細胞數(shù)量減少，但以下三種情況也可能引起百分比下降：

一是單倍體細胞數(shù)不變，其他倍體細胞數(shù)增加；

二是單倍體細胞數(shù)增加，其他倍體細胞數(shù)也增加而且增加得相對較多；

三是單倍體細胞數(shù)減少，其他倍體細胞數(shù)也減少，只是減少得相對較少。

與此類似，該百分比不變可能說明精子發(fā)生未受到影響，但以下兩種情況也可能出現(xiàn)此種結(jié)果：單倍體細胞和其他倍體細胞成比例地增加；單倍體細胞和其他倍體細胞成比例地減少。因此，姑且不論細胞的準確辨認以及組織勻漿過程中細胞粉碎等問題，流式細胞儀估計細胞數(shù)至少存在這樣一個缺陷：一般只能反映細胞的相對數(shù)目比，而不能確定測定的細胞在某感興趣區(qū)域內(nèi)的總數(shù)目是否真的有所增加、減少或不變。

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