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| CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 100T/96S |
| 貨號 | BC5835 | 應用領域 | 環保,化工,生物產業,農業,綜合 |
| 主要用途 | 白蛋白含量檢測 |
白蛋白含量檢測試劑盒（溴甲酚綠顯色法）說明書
微量法
貨號：BC5835
規格：100T/96S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
試劑名稱 | 規格 | 保存條件 |
提取液 | 液體110 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑一 | 液體0.28 mL×1支 | 2-8℃保存 |
試劑二 | 2-8℃保存 | |
試劑三 | 液體0.3 mL×1支 | 2-8℃保存 |
標準品 | 液體1mL×1支 | -20℃保存 |
溶液的配制：
1、 顯色液：臨用前根據樣本數量按照試劑一：試劑二：試劑三=10μL: 990μL:10μL（1010μL，5T）的比例配制顯色液，充分混勻，現配現用；
2、 標準品： 10mg/mL白蛋白標準液。臨用前取200μL10mg/mL白蛋白標準液，加入200μL提取液，配制成5mg/mL白蛋白標準液，現配現用。
產品說明：
白蛋白是人體血漿中最主要的蛋白質，由肝臟合成，是人體內一種重要的營養物質，可以維持血漿滲透壓，并可與多種營養物質、激素和藥物相結合。白蛋白含量可以反映機體營養狀態，也可排查影響肝臟代謝功能的疾病，如肝硬化、肝損傷、營養不良、惡性腫瘤等。
血清白蛋白在pH4.2的緩沖液中帶正電荷，在有非離子型表面活性劑存在時，可與帶負電荷的染料溴甲酚綠結合形成藍綠色復合物，在波長630nm處有吸收峰，其顏色深淺與白蛋白濃度成正比例。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、低溫離心機、分析天平、微量玻璃比色皿/96孔板、可調式移液槍、研缽/勻漿器/細胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
1. 組織樣本：按質量（g）: 提取液體積（mL）為1 : 5~10的比例加入提取液（建議稱取0.1g樣本，加入1.0mL提取液），冰浴勻漿后，于4℃，8000g，離心10min，棄沉淀，取上清液置于冰上待測。
2. 細菌/細胞樣本：按細菌/細胞數量（106）：提取液體積（mL）為5~10 : 1的比例加入提取液（建議5百萬細菌/細胞加入1.0mL提取液），冰浴超聲破碎細菌/細胞（功率200W，超聲3s，間隔7s，總時間5min），然后于4℃，8000g，離心10min，棄沉淀，取上清液置于冰上待測。
3. 液體樣本：直接測定。若液體有渾濁則離心取上清測定。
二、測定步驟
1．可見分光光度計/酶標儀預熱30min以上，調節波長至630nm，可見分光光度計蒸餾水調零。
2．操作表：（微量玻璃比色皿/96孔板中加入下列試劑）
試劑名稱（μL） | 測定管 | 標準管 | 空白管 |
樣本 | 20 | - | - |
標準品 | - | 20 | - |
提取液 | - | - | 20 |
顯色液 | 200 | 200 | 200 |
混勻，常溫靜置20s，于630nm處測定各管吸光值，分別記為A測定、A標準和A空白，計算ΔA測定=A測定-A空白，ΔA標準=A標準-A空白。空白管和標準管只需測1-2次。 注意：靜置時間長短會影響檢測結果，建議直接在微量玻璃比色皿/96孔板中直接反應20s，測定吸光值。 | |||
三、白蛋白含量計算
1. 按樣本蛋白濃度計算
白蛋白含量（mg/mg prot）= ΔA測定×（C標÷ΔA標準）×V樣÷（V樣×Cpr）=5×ΔA測定÷ΔA標準÷Cpr
2. 按樣本質量計算
白蛋白含量（mg/g 質量）= ΔA測定×（C標÷ΔA標準）×V樣÷（W×V樣÷V樣總）=5×ΔA測定÷ΔA標準÷W
3. 按細菌/細胞數量計算
白蛋白含量（mg/106 cell）=ΔA測定×（C標÷ΔA標準）×V樣÷（V樣×N÷V樣總）=5×ΔA測定÷ΔA標準÷N
4. 按液體體積計算
白蛋白含量（mg/mL）= ΔA測定×（C標÷ΔA標準）×V樣÷V樣= 5×ΔA測定÷ΔA標準
C標：標準管濃度，5 mg/mL；V樣：加入樣本體積，0.02mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；N：細菌/細胞總數，以106計。
注意事項：
1、 如果?A測定小于0.010或測定管吸光值接近空白管，可以增加樣本量后再進行測定；如果?A測定大于0.5，建議將樣本上清用提取液適當稀釋后再進行測定。注意同步修改計算公式。
2、 如果樣本加入顯色劑后出現渾濁，建議將樣本上清用提取液適當稀釋后再進行測定。注意同步修改計算公式。
實驗實例：
1. 取20μL人血清樣本，用提取液稀釋10倍，按照測定步驟操作，用96孔板測得計算：ΔA測定=A測定-A空白=0.426-0.124=0.302，ΔA標準=A標準-A空白=0.406-0.124=0.282，按液體體積計算得：
白蛋白含量（mg/mL）=5×ΔA測定÷ΔA標準×10（稀釋倍數）=53.546 mg/mL。
參考文獻：
[1] Tada S, Yasukawa K, Yatomi Y, et al. A simple colorimetric assay to determine the concentration and proportion of human mercaptalbumin[J]. Practical Laboratory Medicine, 2022, 31: e00281.
[2] Khalifa F .Quantitative Determination of Albumin in Serum (By Bromocresol Green)[J]. 2020.
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