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目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-微量法>>微量法生化試劑盒>> BC1445-100T/48S線粒體呼吸鏈復合體Ⅴ活性測試盒 微量法

線粒體呼吸鏈復合體Ⅴ活性測試盒 微量法
  • 線粒體呼吸鏈復合體Ⅴ活性測試盒 微量法
參考價 面議
具體成交價以合同協(xié)議為準
參考價 面議
具體成交價以合同協(xié)議為準
  • 品牌 SOLARBIO/索萊寶
  • 型號 BC1445-100T/48S
  • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
  • 產(chǎn)品資料 查看pdf文檔
  • 所在地 北京市
屬性

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更新時間:2024-07-28 14:58:33瀏覽次數(shù):1093評價

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CAS 詳詢 純度 詳詢
分子量 詳詢 分子式 詳詢
供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 100T/48S
貨號 BC1435 應用領域 環(huán)保,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)業(yè)
主要用途 測定意義:生物體內(nèi)巰基主要包括非蛋白質(zhì)巰基和蛋白質(zhì)巰基。巰基化合物在體內(nèi)具有重要
儲存條件
2-8℃
線粒體呼吸鏈復合體Ⅴ活性測試盒 微量法
有效期
6個月
單位


別名
非蛋白質(zhì)巰基試劑盒 非蛋白質(zhì)巰基測試盒
檢測方法
微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
規(guī)格
100T/48S
自備試劑
該試劑盒實驗過程中需自備試劑,詳情見網(wǎng)站說明書

線粒體呼吸鏈復合體Ⅴ/ATP合酶活性檢測試劑盒說明書
微量法
注意:本產(chǎn)品試劑有所變動,請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號:BC1445
規(guī)格:100T/48S
產(chǎn)品組成:使用前請認真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致,有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱規(guī)格保存條件
提取液液體60mL×1瓶2-8℃保存
試劑一液體50mL×1瓶2-8℃保存
試劑二粉劑×1-20℃保存
試劑三液體6mL×1瓶2-8℃保存
試劑四液體3mL×1瓶2-8℃保存
試劑五粉劑×12-8℃保存
試劑六粉劑×12-8℃保存
試劑七液體10mL×1瓶常溫保存
標準品液體1mL×1支2-8℃保存

溶液的配制:

  1. 試劑二:臨用前每支加入1.11 mL雙蒸水,充分溶解備用,分裝后-20℃保存4周,避免反復凍融;

  2. 試劑五:臨用前加入10mL雙蒸水,充分溶解;-20℃可保存4周;

  3. 試劑六:臨用前加入10mL雙蒸水,充分溶解;2-8℃可保存4周;

  4. 標準品:10 μmol/mL磷標液,臨用前取50μL 10 μmol/mL磷標液,加入1950μL蒸餾水,充分混勻,配制成0.25μmol/mL標準液使用,現(xiàn)用現(xiàn)配(實驗中每管需要40μL,為減小實驗誤差,故配制大體積);

  5. 定磷試劑的配制:根據(jù)用量將H2O:試劑五:試劑六:試劑七=20mL:10mL:10mL:10mL(約100T)混合備用,配好的定磷試劑應為淺黃色。若無色則試劑失效,若是藍色則為磷污染(請根據(jù)需要,用多少配多少)。

注意:配試劑最好用新的燒杯、玻璃棒和玻璃移液器,或者一次性塑料器皿,以避免磷污染。
產(chǎn)品說明:
線粒體復合體又稱F1F0-ATP合酶,廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞的線粒體中,由F1和F0兩個亞單位組成。該酶利用呼吸鏈產(chǎn)生的質(zhì)子電化學梯度催化ATP合成,也可逆過程水解ATP。此外,復合體還存在于葉綠體、異養(yǎng)菌和光合細菌中。復合體是線粒體氧化磷酸化和葉綠體光合磷酸化合成ATP的關鍵酶。
復合體水解ATP產(chǎn)生ADPPi,通過測定Pi增加速率來測定復合體活性。
   
注意:實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品:
臺式離心機、可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、微量玻璃比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、超聲破碎儀、冰和蒸餾水。
操作步驟:具體操作步驟詳見“產(chǎn)品資料"附件
注意事項:

  1. 為保證實驗結(jié)果的準確性,需先取1-2個樣做預實驗,如果測定的吸光值過高(高于1),可用蒸餾水稀釋上清液后再測定。計算結(jié)果時注意乘以稀釋倍數(shù)。

  2. 測定胞漿時,定磷后反應液可能會有絮凝產(chǎn)生,測定前混合均勻即可,并不影響測定結(jié)果。

  3. 推薦使用樣本蛋白濃度計算酶活,若用樣本質(zhì)量計算,則需加測胞漿提取物酶活,上清和沉淀酶活之和方為總酶活。

  4. 本試劑盒試劑足夠完成100管反應。

  5. 附:使用樣本重量計算公式:(樣本檢測數(shù)為100T/24S

  1. 上清中復合體活力的計算:

單位的定義:每g組織在反應體系中每分鐘產(chǎn)生1nmol無機磷定義為一個酶活性單位。
復合體活性(U/g 質(zhì)量)=ΔA1÷ΔA標準×C標準×V酶促×1000÷(W÷V提取×V樣本)÷T
=20×ΔA1÷ΔA標準÷W
ΔA1:上清測定值;C標準:標準溶液濃度,0.25μmol/mL1000:單位換算系數(shù),1μmol=1000nmolV提取:加入提取液體積,1.0mLV樣本:樣本體積,0.05mLV酶促:酶促反應總體積,0.12mLT:反應時間,30min
B、沉淀中復合體活力的計算:
單位的定義:每g組織在反應體系中每分鐘產(chǎn)生1 nmol 無機磷定義為一個酶活性單位。
復合體活性(U/g 質(zhì)量)=ΔA2÷ΔA標準×C標準×V酶促×1000÷(W÷V提取×V樣本)÷T
=12×ΔA2÷ΔA標準÷W
ΔA2:沉淀測定值;C標準:標準溶液濃度,0.25μmol/mL1000:單位換算系數(shù),1μmol=1000nmolV提取:沉淀重懸體積,0.6mLV樣本:樣本體積,0.05mLV酶促:酶促反應總體積,0.12mLT:反應時間,30min
C、樣本復合體總活力的計算:
樣本復合體總活力即為上清中復合體活力與沉淀中復合體活力之和。
按樣本質(zhì)量計算:復合體(U/g 質(zhì)量)=20×ΔA1÷ΔA標準÷W+12×ΔA2÷ΔA標準÷W
實驗實例:

  1. 取0.1g兔子腎臟進行樣本處理,上清液和沉淀都稀釋4倍后按照測定步驟操作,使用96孔板測得ΔA標準=A標準管-A空白管=0.379-0.047=0.332上清液的ΔA1=A測定管-A對照管=0.679-0.119=0.560,沉淀的ΔA2=A測定管-A對照管=0.773-0.052=0.721,則按樣本質(zhì)量計算得:上清中復合體活性(U/g 質(zhì)量)=20×ΔA1÷ΔA標準÷W×4(稀釋倍數(shù))=1349.4 U/g 質(zhì)量沉淀中復合體活性(U/g 質(zhì)量)=12×ΔA2÷ΔA標準÷W×4(稀釋倍數(shù))=1042.4 U/g 質(zhì)量復合體U/g 質(zhì)量)=20×ΔA1÷ΔA標準÷W×4+12×ΔA2÷ΔA標準÷W×4=2391.8 U/g 質(zhì)量。

  2. 取0.1g冬青進行樣本處理,上清液和沉淀都稀釋2倍后按照測定步驟操作,使用96孔板測得ΔA標準=A標準管-A空白管=0.379-0.047=0.332上清液的ΔA1= A測定管-A對照管=0.535-0.320=0.215,沉淀的ΔA2=A測定管-A對照管=0.357-0.089=0.268,則按樣本質(zhì)量計算得:上清中復合體活性(U/g 質(zhì)量)=20×ΔA1÷ΔA標準÷W×2(稀釋倍數(shù))=259.04 U/g 質(zhì)量 沉淀中復合體活性(U/g 質(zhì)量)=12×ΔA2÷ΔA標準÷W×2(稀釋倍數(shù))=193.73 U/g 質(zhì)量復合體U/g 質(zhì)量)=20×ΔA1÷ΔA標準÷W×2+12×ΔA2÷ΔA標準÷W×2=452.77 U/g 質(zhì)量。

相關發(fā)表文獻:

  1. Qiuli OuYang,Nengguo Tao,Miaoling Zhang. A Damaged Oxidative Phosphorylation Mechanism Is Involved in the Antifungal Activity of Citral against Penicillium digitatum. Frontier in Immunology. February 2018;(IF4.259)  

  2. Wang M, Zhang Y, Xu M, et al. Roles of TRPA1 and TRPV1 in cigarette smoke-induced airway epithelial cell injury model[J].Free Radical Biology and Medicine,2019,134:229-238.

相關系列產(chǎn)品:
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BC3230/BC3235 線粒體呼吸鏈復合體活性檢測試劑盒
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