目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-微量法>>微量法生化試劑盒>> BC2655-100T/48S濾紙酶檢測試劑盒 微量法
| CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 100T/48S |
| 貨號 | BC2655 | 應用領域 | 環保,化工,生物產業,農業,綜合 |
| 主要用途 | 測定意義：纖維素酶是由微生物產生的多組分的酶系,能水解纖維素β-1,4葡萄糖苷鍵 |
濾紙酶（FPA）活性檢測試劑盒
說明書
微量法
貨號：BC2655
規格：100T/48S
產品內容：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
| 試劑名稱 | 規格 | 保存條件 |
| 試劑一 | 液體35 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑二 | 液體60 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 濾紙條 | 25 mg×100條 | 常溫保存 |
| 標準品 | 粉劑×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
濾紙條：常溫防潮保存。
標準品：10mg無水*萄糖。臨用前加入1 mL蒸餾水溶解，配成10 mg/mL 葡萄糖溶液備用，2-8℃保存兩周。
產品說明：
纖維素酶是降解纖維素生成葡萄糖一類酶的總稱，它不是單體酶，而是起協同作用的多組分酶系。以不溶性纖維素如濾紙為底物測定的纖維素酶稱為濾紙酶，研究濾紙酶活力對纖維素酶總體酶活力的研究的有著重要意義。
FPA水解濾紙產生還原糖，還原糖與3,5-二硝基水楊酸反應生成在540 nm有特征吸收峰的棕紅色物質，通過測定540 nm處吸光值變化可計算得FPA活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、臺式低溫離心機、水浴鍋、超聲破碎儀、微量玻璃比色皿/96孔板、可調式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水、EP管（2 mL）。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產品資料"附件
三、FPA活性計算
標準曲線的繪制：
根據標準管的濃度（x，mg/mL）和吸光度ΔA標準（y，ΔA標準），建立標準曲線。根據標準曲線，將ΔA測定（y，ΔA測定）帶入公式計算樣本濃度（x，mg/mL）。
FPA活性的計算：
（1）按蛋白濃度計算
酶活定義：每mg蛋白每分鐘分解濾紙產生1 mg葡萄糖為1個酶活力單位。
FPA酶活（U/mg prot）=x×V提取÷（V提取×Cpr）÷T=0.0333x÷Cpr
（2）按樣本質量計算
酶活定義：每g樣品每分鐘分解濾紙產生1 mg葡萄糖為1個酶活力單位。
FPA酶活（U/g 質量）=x×V提取÷W÷T=0.0333x÷W
（3）按照細胞或細菌數量計算
酶活定義：每104個細胞每分鐘分解濾紙產生1 mg葡萄糖為1個酶活力單位。
FPA酶活（U/104 cell）=x×V提取÷細胞數量（萬個）÷T=0.0333x÷細胞數量（萬個）
（4）按液體體積計算
酶活定義：每mL樣本每分鐘分解濾紙產生1 mg葡萄糖為1個酶活力單位。
FPA酶活（U/mL）=x×V樣÷V樣÷T=0.0333x
V提取：提取液（蒸餾水）體積，1 mL；V樣：加入的樣本體積，0.1 mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL，蛋白濃度自行測定；W：樣本質量，g；T：反應時間，30 min。
注意事項：
用干凈的鑷子取出濾紙條，帶手套將濾紙條卷成小卷放入Ep管底部。
當A或ΔA超過1時，建議將樣本用蒸餾水稀釋后再進行測定，計算公式中乘以稀釋倍數。
顯色結束吸取檢測液時注意槍頭不要碰到濾紙條，以免帶入毛狀物，影響測定結果。
實驗實例：
取0.1g平菇傘部加入1mL蒸餾水，冰浴勻漿后于4℃，12000 rpm離心10 min，取上清置于冰上待測。之后按照測定步驟操作，使用96孔板測得計算ΔA測定=A測定管-A對照管=0.744-0.536=0.208，帶入測得標準曲線y=1.0495x-0.1471，計算x=0.3384，按樣本質量計算酶活得：
FPA酶活（U/g質量）=x×V提取÷W÷T=0.0333x÷W=0.113 U/g質量。
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