目錄:北京索萊寶科技有限公司>>生化檢測試劑盒-微量法>>微量法生化試劑盒>> BC2555-100T/48Sα-葡萄糖苷酶活性檢測試劑盒 微量法
| CAS | 詳詢 | 純度 | 詳詢 |
|---|---|---|---|
| 分子量 | 詳詢 | 分子式 | 詳詢 |
| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 100T/48S |
| 貨號 | BC2555 | 應用領域 | 環保,化工,生物產業,農業,綜合 |
| 主要用途 | 測定意義：α-GC(EC 3.2.1.20)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細 |
α-葡萄糖苷酶（α-GC）活性檢測試劑盒說明書
微量法
注意：本產品試劑有所變動，請注意并嚴格按照該說明書操作。
貨號：BC2555
規格：100T/48S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。
| 試劑名稱 | 規格 | 保存條件 |
| 提取液 | 液體100 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑一 | 粉劑×2瓶 | -20℃保存 |
| 試劑二 | 液體15 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 試劑三 | 液體15 mL×1瓶 | 2-8℃保存 |
| 標準品 | 液體1 mL×1支 | 2-8℃保存 |
溶液的配制：
1、試劑一：臨用前取1瓶加入6 mL蒸餾水充分溶解；用不完的試劑建議-20℃分裝保存4周，避免反復凍融；
2、標準品：5 μmol/mL的對*溶液。
產品說明：
α-GC(EC 3.2.1.20)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，催化水解芳基或烴基與糖基之間的α-糖苷鍵生成葡萄糖，不僅與細胞壁的松弛或加固有關，而且與細胞識別和一些信號分子產生密切相關。
α-GC分解對-硝 基苯-α-D-吡喃葡萄糖苷生成對-*，后者在400nm有最大吸收峰，通過測定吸光值升高速率來計算α-GC活性。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計/酶標儀、低溫離心機、水浴鍋/恒溫培養箱、超聲破碎儀、可調式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產品資料"附件
一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）
1、細菌或培養細胞的處理：收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照每1000萬細菌或細胞加入1mL提取液，超聲波破碎細菌或細胞（功率200W，超聲3秒，間隔10秒，重復30次），15000g，4℃，離心20min，取上清，置冰上待測。
2、組織的處理：稱取約0.2g組織，加入1mL提取液進行冰浴勻漿；15000g，4℃，離心20min，取上清，置冰上待測。
3、液體樣本：直接檢測。若溶液有渾濁需離心后取上清進行測定。
二、測定步驟
分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節波長至400nm，分光光度計蒸餾水調零。
標準溶液的稀釋：將5μmol/mL的標準液用蒸餾水稀釋成100、50、25、12.5、6.25、0 nmol/mL標準溶液待測。
標準液稀釋可參考下表：
| 序號 | 稀釋前濃度（nmol/mL） | 標準液體積（µL） | 蒸餾水體積（µL） | 稀釋后濃度（nmol/mL） |
| 1 | 5000 | 100 | 400 | 1000 |
| 2 | 1000 | 200 | 1800 | 100 |
| 3 | 100 | 1000 | 1000 | 50 |
| 4 | 50 | 1000 | 1000 | 25 |
| 5 | 25 | 1000 | 1000 | 12.5 |
| 6 | 12.5 | 1000 | 1000 | 6.25 |
| 7 | 6.25 | 0 | 1000 | 0（空白管） |
備注：實驗中每個標準管需70µL標準溶液。
加樣表
| 試劑名稱（μL） | 測定管 | 對照管 | 標準管 | ||||||
| 試劑一 | 100 | ||||||||
| 試劑二 | 150 | 150 | |||||||
| 樣本 | 30 | 30 | |||||||
| 充分混勻，放入37℃水浴鍋/恒溫培養箱中準確反應30min后，立即放入沸水浴中煮沸5min（蓋緊，以防止水分散失），流水冷卻后充分混勻（以保證濃度不變） | |||||||||
| 試劑一 | 100 | ||||||||
| 充分混勻，8000g，4℃，離心5min，取上清液（在EP管或96孔板中加入下列試劑） | |||||||||
| 上清液 | 70 | 70 | |||||||
| 標準液 | 70 | ||||||||
| 試劑三 | 130 | 130 | 130 | ||||||
| 充分混勻，室溫靜置2min后，于400nm處測定吸光值A，分別記為A測定管、A對照管、A標準管、A空白管。計算ΔA測定=A測定管-A對照管。ΔA標準=A標準管-A空白管。每個測定管需設一個對照管。標準曲線和空白管只需測1-2次。 | |||||||||
參考文獻：
[1] Wang S Y, Camp M J, Ehlenfeldt M K. Antioxidant capacity and α-glucosidase inhibitory activity in peel and flesh of blueberry (Vaccinium spp.) cult ivars[J]. Food Chemistry, 2012, 132(4): 1759-1768.
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