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熒光定量PCR板實(shí)驗(yàn)，細(xì)節(jié)決定成敗，有哪些注意事項(xiàng)不能忽視？
熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)時(shí)，首先要做好防護(hù)，佩戴一次性乳膠手套并經(jīng)常更換，使用負(fù)壓式生物安全柜防止污染。實(shí)驗(yàn)中，嚴(yán)格防止氣溶膠交叉污染，使用一次性帶濾芯移液吸頭，不在生物安全柜以外開啟試劑或PCR管。試劑和樣本需嚴(yán)格按照生物安全規(guī)定操作，熒光探針避光保存，RNA操作時(shí)使用無RNase的實(shí)驗(yàn)器具。所有試劑在開啟前后都要瞬時(shí)離心以去除氣泡。加樣時(shí)，避免在PCR管上做標(biāo)記，不能用手接觸采光部位。實(shí)驗(yàn)中，設(shè)置無模板對(duì)照以排除非特異性反應(yīng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，使用過的槍頭、EP管密封存放。注意模板降解、引物探針設(shè)計(jì)、Mg2+濃度等問題，確保擴(kuò)增曲線和熔解曲線的特異性。