CY5.5-卵清蛋白（Cy5.5 labeled ovalbumin）是一種重要的熒光標記物，由近紅外熒光染料CY5.5與卵清蛋白（ovalbumin，OVA）通過化學方法共價連接而成。以下是關于CY5.5-卵清蛋白的詳細介紹：

一、組成成分

CY5.5-卵清蛋白由兩部分組成：

1. 近紅外熒光染料CY5.5：

• 性質：具有優異的光學特性，其激發波長約為675nm，發射波長約為695~710nm，處于近紅外區域。

• 作用：作為熒光標記物，使CY5.5-卵清蛋白在生物成像中具有更深的組織穿透能力和更低的背景自發熒光干擾。

2. 載體蛋白卵清蛋白：

• 性質：一種常用的生物大分子載體，具有多個反應性位點，如賴氨酸殘基上的氨基，可以與CY5.5的活性基團（如NHS酯）進行共價連接。

• 來源：通常從雞蛋清中提取，分子量約為43kDa。

• 作用：作為CY5.5的載體，提高其在體內的穩定性和生物相容性。

二、合成方法

CY5.5標記卵清蛋白的過程通常包括以下幾個步驟：

1. 將CY5.5-NHS酯溶解在少量無水有機溶劑（如DMSO或DMF）中，確保其在水溶液中不會快速水解。

2. 在緩沖溶液中（如pH 8.0左右的PBS緩沖液）加入適量的卵清蛋白溶液。

3. 緩慢加入CY5.5-NHS酯溶液到卵清蛋白溶液中，同時輕輕攪拌，以促進酯與蛋白質氨基的偶聯反應。通常在室溫或冰浴條件下反應1~2小時。

4. 調整pH值以保持在8.0附近，有助于提高酰胺鍵的形成效率。

5. 使用凝膠過濾或透析的方法去除未反應的CY5.5-NHS酯和其他小分子。

6. 純化后得到的CY5.5標記卵清蛋白可以通過吸光度和熒光光譜測定標記效率。

三、特性與應用

1. 熒光特性：由于CY5.5染料的激發和發射波長處于近紅外區域，使得CY5.5-卵清蛋白在生物成像中具有更深的組織穿透能力和更低的背景自發熒光干擾，從而提高成像的清晰度和準確性。

2. 光穩定性：CY5.5染料在生理條件下穩定，不易受到光漂白的影響，能夠保持長時間的熒光信號。這使得CY5.5-卵清蛋白在長時間的成像實驗中仍能保持穩定的熒光強度，適用于活體成像和實時檢測。

3. 生物兼容性：CY5.5是水溶性染料，易于與蛋白質結合，且通常不會顯著影響蛋白質的功能或結構。卵清蛋白也具有良好的生物相容性，因此CY5.5-卵清蛋白在生物體內應用中具有較高的安全性。

4. 應用：

• 生物成像：可用于熒光顯微鏡觀察、流式細胞分析、蛋白質印跡等應用中。通過與特定的抗體結合，可以用于檢測組織或細胞中的抗原，實現熒光成像和定量分析。

• 藥物研發：CY5.5-卵清蛋白的近紅外熒光發射特性使其能夠穿透生物組織，因此特別適合用于體內成像和藥物分布、代謝等方面的研究。通過監測CY5.5-卵清蛋白在體內的分布和代謝情況，可以為藥物研發提供重要的信息。

• 免疫研究：卵清蛋白作為常用的載體蛋白，具有良好的免疫原性。CY5.5-卵清蛋白可用于免疫學研究，如作為免疫原制備抗體、研究免疫反應等。

四、注意事項

1. CY5.5-卵清蛋白通常僅用于科學研究實驗，不適合人類或獸醫使用。

2. 在使用過程中應嚴格遵循實驗室操作規范，確保人身安全和實驗效果。

3. 儲存時應在適當的低溫條件下保存，以保持其穩定性和活性。

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