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小鼠去甲腎上腺素(NA)酶聯免疫分析試劑盒使用說明書

來源:上海依赫生物科技有限公司   2016年03月26日 15:32  

小鼠去甲腎上腺素(NA)酶聯免疫分析試劑盒使用說明書

  本試劑盒僅供研究使用。

  【檢測范圍】96T

  3pg/ml-120pg/ml

  【使用目的】

  本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關液體樣本中去甲腎上腺素(NA)含量。

  【實驗原理】

  本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠去甲腎上腺素(NA)水平。用純化的小鼠去甲腎上腺素(NA)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入去甲腎上腺素(NA),再與HRP標記的去甲腎上腺素(NA)抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的去甲腎上腺素(NA)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中小鼠去甲腎上腺素(NA)濃度。

  試劑盒組成

1     30倍濃縮洗滌液   20ml×1瓶    7   終止液           6ml×1瓶

2     酶標試劑         6ml×1瓶     8   標準品(240pg/ml)0.5ml×1瓶

3     酶標包被板       12孔×8條    9   標準品稀釋液     1.5ml×1瓶

4     樣品稀釋液       6ml×1瓶    10  說明書           1份

5     顯色劑A液       6ml×1瓶     11  封板膜            2張

6    顯色劑B液       6ml×1/瓶   12 密封袋            1個

 

【標本要求】

  1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融

  2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

  

【操作步驟】

  

1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

  120pg/ml         5號標準品          150的原倍標準品加入150標準品稀釋液

  60pg/ml          4號標準品         150的5號標準品加入150標準品稀釋液

   30pg/ml         3號標準品           150的4號標準品加入150標準品稀釋液

15pg/ml         2號標準品            150的3號標準品加入150標準品稀釋液

    7.5pg/ml         1號標準品             150的2號標準品加入150標準品稀釋液

2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40,然后再加待測樣品10(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

  3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

  4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

  5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。

  6. 加酶:每孔加入酶標試劑50,空白孔除外。

  7. 溫育:操作同3。

  8. 洗滌:操作同5。

  9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50,再加入顯色劑B50,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

  10. 終止:每孔加終止液50,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

  11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

  【操作程序總結】

  計算

  以標準物的濃度為橫坐標,OD值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。

  注意事項

  1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

  2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。

  3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,推薦使用排槍加樣。

  4. 請每次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。

  5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

  6.底物請避光保存。

  7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

  8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

  9.本試劑不同批號組分不得混用。

  10. 如與英文說明書有異,以英文說明書為準。

  保存條件及有效期

  1.試劑盒保存:;2-8℃。

  2.有效期:6個月

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