關鍵詞:DNA合成|實驗技術服務
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DNA合成|實驗技術服務——pCzn1質粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
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測序實驗流程:
DNA復制的一般過程:
DNA雙螺旋是由兩條方向相反的單鏈組成,復制開始時,雙鏈打開,形成一個復制叉(replicative fork,從打開的起點向一個方向形成)或一個復制泡(replicative bubble,從打開的起點向兩個方向形成。)兩條單鏈分別做模板。各自合成一條新的DNA鏈。由于DNA一條鏈的走向是5′→3′方向,另一條鏈的走向是3′→5′方向,但生物體內DNA聚合酶只能催化DNA從5′→3′的方向合成。那么,兩條方向不同的鏈怎樣才能做模板呢?這個問題由日本學者崗崎解決。
原來,在以3′→5′方向的母鏈為模板時,復制合成出一條5′→3′方向的前導鏈(leadingstrand),前導鏈的前進方向與復制叉打開方向是一致的,因此前導鏈的合成是連續進行的,而另一條母鏈DNA是5′→3′方向,它作為模板時,復制合成許多條5′→3′方向的短鏈,叫做隨從鏈(lagging strand),隨從鏈的前進方向是與復制叉的打開方向相反的。隨從鏈只能先以片段的形式合成,這些片段就叫做崗崎片段(Okazaki fragments),原核生物崗崎片段含有1000-2000核苷酸,真核生物一般100?00核苷酸。zui后再將多個崗崎片段連接成一條完整的鏈。由于前導鏈的合成是連續進行的,而隨從鏈的合成是不連續進行的,所以從總體上看DNA的復制是半不連續復制。
1、DNA復制機理--半保留復制
半保留復制(semiconservative replication)是DNA生物合成的一個重要特征。是指DNA合成(復制)時,雙鏈解開,分別作為模板(template)指導DNA的合成,合成的子代新生雙鏈DNA中,總有一條來自親代DNA......
2、DNA復制的酶類
參與DNA復制的主要物質有:底物,即dATP,dGTP,dCTP 和 dTTP,總稱為dNTP; DNA聚合酶(polymerase);模板(template),即雙鏈DNA解開形成的單鏈;引物(primer),引導新生DNA的產生;其他......
3、DNA復制過程
DNA復制時,首先需要解開雙鏈,再生成引發體,在引發體的基礎上開始合成新鏈。復制中的新鏈總是沿5′向3′端方向延伸,即底物dNTP去掉焦磷酸并以磷酸二酯鍵方式連接在延伸中的DNA鏈3′端的-OH上,一個接一個地疊加。由于DNA的雙鏈的走向......
4、DNA復制過程的調控
原核及其它低等生物與高等生物DNA復制的調控模式可能不同,同一生物的調控模式也可有不同的變化。對DNA復制的調節既有正調節也有負調節。
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