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操作真空手套箱應注意以下幾點：
1、如箱體出現漏氣，應首先檢查過渡室門是否關緊和手套口是否破損。如還有漏氣請檢查真空表座、閥門及兩個門上的“O”型圈及真空橡皮。過渡室門與手套口門上的“O”型圈要定期更換（根據用戶的使用頻率而定）
2、不管打開內門還是外門，都必須保證門兩邊的氣壓基本平衡，否則，要么打不開，要么發生“氣爆”現象。同樣，在對箱體內抽氣與充氣時，也必須保證三通閥處于打開狀態（即保證手套內外的氣壓相等），否則，手套會膨脹爆裂。
3、對系統抽氣時，請緩緩打開閥門，并隨時注意手套的變化，如出現膨脹，應減慢抽氣速度，如仍不能解決問題，應停止抽氣，如手套發生爆裂，檢查三通閥是否打開。
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