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氨基酸( AA)含量檢測試劑盒（微量法）

來源：上海尚寶生物科技有限公司 2025年04月27日 11:19

氨基酸( AA)含量檢測試劑盒（微量法）

產(chǎn)品貨號：BA1044

產(chǎn)品規(guī)格：100管/96樣

產(chǎn)品內(nèi)容：

試劑一：液體100mL×1瓶，4℃保存。

試劑二：液體20mL×1瓶，4℃保存。

試劑三：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前加入1.33mL無水乙醇，蓋緊后充分混勻，再加入18.67 mL蒸餾水混勻，避光保存。

試劑四：粉劑×1支，4℃避光保存。臨用前加2mL蒸餾水，充分溶解。

標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1支，10mg半胱氨酸，4℃保存。臨用前加入8.26mL蒸餾水，得到10μmol/mL的半胱氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。

產(chǎn)品說明：

動(dòng)物肝臟、腎臟是氨基酸代謝的主要器官，故尿中氨基酸的變化最能反應(yīng)肝、腎的生理狀態(tài)。另外，氨基酸還能反應(yīng)灼傷、傷寒等方面情況。植物體內(nèi)氨基酸含量對研究植物在不同條件下及不同生長發(fā)育時(shí)期氮代謝變化、植物對氮素的吸收、運(yùn)輸、同化及營養(yǎng)狀況等有重要意義。

氨基酸的α-氨基可與水合茚三酮反應(yīng)，產(chǎn)生藍(lán)紫色化合物，在570 nm有特征吸收峰；通過測定570nm吸光度，來計(jì)算氨基酸含量。

需自備的儀器和用品：

臺式離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、微量玻璃比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、無水乙醇、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一、樣品的提取：

(1) 組織樣本：稱取約0.1g組織，加試劑一1mL，室溫下充分研磨，轉(zhuǎn)移到1.5mLEP管中，蓋緊后（防止水分散失）置于沸水浴提取15min；自來水冷卻后，10000rpm，4℃離心10min，取上清液，待測。

(2) 細(xì)菌或細(xì)胞樣本：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL試劑一，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率20％，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；10000rpm，4℃離心10min，取上清液，待測。

二、測定步驟：

1、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至570nm，蒸餾水調(diào)零。

2、操作表：（在EP管中進(jìn)行）

試劑名稱（μL）	測定管	標(biāo)準(zhǔn)管	空白管
樣本	10	-	-
標(biāo)準(zhǔn)液	-	10	-
蒸餾水	-	-	10
試劑二	100	100	100
試劑三	100	100	100
試劑四	10	10	10
混勻后蓋緊瓶蓋（防止水分散失），置于沸水浴中保溫15min，冷卻后反復(fù)顛倒EP管數(shù)次， 8000rpm 離心5min后取上清，于570nm測定吸光值，分別記為A測定管、A標(biāo)準(zhǔn)管、A空白管，并計(jì)算ΔA測定管=A測定管-A空白管，ΔA標(biāo)準(zhǔn)管=A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管，顯色后務(wù)必在30min內(nèi)測完。

三：氨基酸含量計(jì)算：

（1）按樣本質(zhì)量計(jì)算

氨基酸含量（μmol /g 鮮重）=（C標(biāo)準(zhǔn)品×V標(biāo)準(zhǔn)品×ΔA測定管÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)管）÷（W÷V樣總×V樣）

=10×ΔA測定管÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)管÷W

（2）按蛋白濃度計(jì)算

氨基酸含量（μmol /mg prot）=（C標(biāo)準(zhǔn)品×V標(biāo)準(zhǔn)品×ΔA測定管÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)管）÷（Cpr×V樣）

=10×ΔA測定管÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)管÷Cpr

（3）按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

氨基酸含量 (μmol/10⁴cell) =(C標(biāo)準(zhǔn)品×V標(biāo)準(zhǔn)品×ΔA測定管÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)管)÷（500×V樣÷V樣總）

=0.02×ΔA測定管÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)管

（4）按液體體積計(jì)算

氨基酸含量（μmol/mL）=（C標(biāo)準(zhǔn)品×ΔA測定管÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)管）×2=20×ΔA測定管÷ΔA標(biāo)準(zhǔn)管

C標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品濃度，10μmol/mL；V標(biāo)準(zhǔn)品：反應(yīng)體系中加入標(biāo)準(zhǔn)品體積，0.01mL；W：樣品鮮重，g；V樣：反應(yīng)體系中加入樣品體積，0.01mL；V樣總：樣品提取液總體積，1mL；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬個(gè)；2：提取液體時(shí)的稀釋倍數(shù)，（V液體+V試劑一）/V液體=2。

注意事項(xiàng)：

1、試劑盒中試劑三和試劑四均需臨用前配制，且避光保存。

2、為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，需先取1-2個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn)。

3、脯氨酸和羥脯氨酸與茚三酮反應(yīng)在570nm處無吸收峰，因此，570nm處測定結(jié)果不含這兩種氨基酸的量。

4、如果樣本吸光值大于0.78，建議將樣本用試劑一稀釋后進(jìn)行測定。

5、因提取過程中會(huì)使蛋白變性，若使用蛋白濃度計(jì)算時(shí)需用PBS單獨(dú)提取后再測定。