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PCR溫度校驗儀是確保PCR儀溫度控制精度的關鍵設備，其校準需遵循嚴格流程。以下是校準的核心步驟及注意事項：
一、校準前準備
環境控制
確保校準環境溫度為15-30℃，濕度≤75%RH，避免環境波動影響結果。
設備需預熱30分鐘，待內部溫度穩定后再進行校準。
標準器選擇
使用高精度溫度標準器(如二等標準鉑電阻溫度計或黑體輻射源)，校準不確定度需≤校準儀允許誤差的1/3。
示例：若校準儀允許誤差為±0.1℃，則標準器不確定度需≤0.03℃。
校準點設置
覆蓋PCR儀全溫區(如35-100℃)，關鍵校準點包括：
變性溫度(94-95℃)、退火溫度(50-65℃)、延伸溫度(72℃)。
邊緣溫度點(如35℃、100℃)用于驗證線性度。
二、校準步驟
零點校準
將溫度傳感器置于冰水混合物(0℃)中，調整設備顯示值為0.000℃，誤差需≤±0.05℃。
多點校準
升溫過程：從35℃開始，每5℃遞增至100℃，記錄實際溫度與顯示值的偏差。
降溫過程：從100℃降至35℃，重復上述記錄。
示例數據：
動態響應測試均勻性測試
在加熱模塊上放置多個溫度傳感器(如96孔板對應位置)，測量不同位置的溫差。
示例：若最大溫差超過±0.5℃，需調整加熱模塊或更換傳感器。
記錄設備從35℃升至95℃的升溫速率(應≥1.5℃/s)，以及從95℃降至35℃的降溫速率(應≥1.5℃/s)。
超調量需≤1℃，穩定時間≤10秒。
三、校準后處理
結果判定
溫度偏差≤±0.1℃、均勻性≤±0.5℃、動態響應符合要求，則校準合格。
若不合格，需排查傳感器、加熱模塊或控制電路故障。
證書與記錄
生成校準證書，記錄校準日期、環境條件、校準點數據及結論。
保存原始記錄至少5年，以備追溯。
四、注意事項
傳感器保護：避免傳感器接觸腐蝕性液體或機械損傷。
定期核查：每6個月進行一次期間核查，使用核查標準(如恒溫油槽)驗證穩定性。
法規遵循：校準需符合ISO 17025、CNAS-CL01等實驗室認可要求。
通過以上步驟，可確保PCR溫度校驗儀的準確性，從而保障PCR儀溫度控制的可靠性。
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