加長超聲波破碎儀的提取方法
1.樣品準(zhǔn)備
組織處理:將清洗后的組織用攪切機切碎成小塊,混懸在至少兩倍體積的緩沖液中。
細(xì)胞處理:洗去培養(yǎng)液的細(xì)胞,混懸在至少兩倍體積的緩沖液中。
濃度與體積控制:過高濃度的樣品可能導(dǎo)致超聲波傳遞效率降低,需適當(dāng)稀釋,并確保樣品均勻分散。
2.超聲破碎操作
探頭操作:將超聲探頭沒入混懸液內(nèi),避免直接接觸容器底部或側(cè)壁。
參數(shù)設(shè)置:總超聲時間約2分鐘,分為4個周期(如4×30秒),周期之間需將樣品置于冰浴中冷卻,防止過熱。
功率與頻率:根據(jù)樣品特性選擇合適的超聲波頻率和功率,初次使用建議從低功率開始,逐步調(diào)整至最佳參數(shù)。
3.冷卻與安全
溫度控制:超聲處理過程中會產(chǎn)生熱量,需配合冰水浴或冷卻裝置,確保樣品溫度穩(wěn)定。
防護(hù)措施:操作時佩戴耳塞或耳罩,防止高強度噪音損傷聽力;避免液體飛濺,防止樣品污染或操作人員受傷。
4.后續(xù)處理
離心與分離:超聲破碎后,通過離心分離細(xì)胞碎片和上清液,提取目標(biāo)成分。
重復(fù)提?。焊鶕?jù)實驗需求,可重復(fù)超聲破碎步驟,提高提取效率。
加長超聲波破碎儀的提取原理
1.空化效應(yīng)
超聲波在液體中傳播時,產(chǎn)生壓力變化,形成微小氣泡。這些氣泡在聲波作用下快速膨脹與收縮,最終在臨界點瞬間崩潰,釋放巨大能量,形成沖擊波和微激波,對細(xì)胞壁施加強烈剪切力,導(dǎo)致細(xì)胞破裂。
2.機械效應(yīng)
超聲波的機械振動使液體介質(zhì)中的物質(zhì)質(zhì)點產(chǎn)生高頻震動,增強物質(zhì)擴散和傳播。輻射壓強沿聲波方向傳播,對物料產(chǎn)生破壞作用,使細(xì)胞組織變形,蛋白質(zhì)變性,促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)容物釋放。
3.熱效應(yīng)
超聲波在液體中傳播時,能量被物質(zhì)質(zhì)點吸收并轉(zhuǎn)化為熱量,導(dǎo)致局部溫度升高。這種瞬時升溫可加速細(xì)胞內(nèi)成分的溶解,但需通過冷卻措施控制溫度,防止目標(biāo)成分失活。
4.微環(huán)境效應(yīng)
超聲波在微環(huán)境內(nèi)產(chǎn)生湍動、微擾、界面和聚能等額外效應(yīng),擴大物質(zhì)分子運動速率和穿透力,提高目標(biāo)成分從固相到液相的傳質(zhì)速率。
應(yīng)用與優(yōu)勢
高效提取:超聲波破碎儀可快速破碎細(xì)胞,釋放高純度、高活性的蛋白質(zhì)、多肽等生物分子,提取效率是傳統(tǒng)方法的10倍以上。
廣泛適用性:適用于動植物組織、細(xì)胞、細(xì)菌、病毒孢子等生物樣本的破碎,以及乳化、分離、分散、勻化、提取等操作。
靈活調(diào)控:超聲時間、功率連續(xù)可調(diào),支持創(chuàng)建并儲存多達(dá)20組操作程序,滿足不同實驗需求。
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