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賽默飛液相色譜儀作為高效液相色譜（HPLC）技術的核心設備，其操作規范性直接影響分析結果的準確性和儀器使用壽命。以下從實驗準備、儀器操作、數據處理及維護保養四個維度，系統闡述賽默飛液相色譜儀的標準操作流程。
一、實驗準備階段
1.流動相配制：選用色譜純（LC）級溶劑，使用0.45μm微孔濾膜過濾后，超聲脫氣10-20分鐘。例如，含緩沖鹽的流動相需脫氣5分鐘，防止氣泡影響泵送精度。
2.色譜柱預處理：根據分析目標選擇填料類型（如C18、硅膠柱），用流動相以1.0mL/min流速平衡30-60分鐘，期間需監測基線穩定性。
3.樣品預處理：所有樣品需過濾去除顆粒物，酸性樣品可加入1%醋酸改善峰形，堿性樣品則添加10-20mmol/L三乙胺。
二、儀器操作流程
1.開機自檢：依次啟動泵、進樣器、柱溫箱和檢測器電源，等待1-2分鐘至變色龍服務管理器激活。
2.管路排氣：擰松泵單元快速清洗閥，設置A通道流速3.0mL/min沖洗2分鐘，重復操作B、C通道，確保流動相連續無氣泡。
3.方法設置：通過“創建”菜單設定儀器方法，設置流動相比例（如A:C=40:60）、流速（1.0mL/min）及檢測波長（如230nm），保存至Chromeleon 7軟件固定文件夾。
4.樣品分析：將標準品和樣品置于自動進樣器固定位置，啟動序列分析，記錄保留時間和峰面積數據。
三、數據處理與關機
1.數據采集：利用軟件自動積分功能處理色譜圖，若出現拖尾峰或前沿峰，需調整流動相比例或更換色譜柱。
2.關機維護：分析結束后，先用甲醇:水=5:95沖洗色譜柱30分鐘，再用100%甲醇沖洗30分鐘。關閉軟件后，從下至上依次關閉各單元電源，填寫使用記錄。
四、維護保養要點
1.日常維護：每日用稀硝酸溶液超聲清洗過濾器，避免鹽類結晶堵塞管路。
2.色譜柱保護：使用保護柱延長壽命，當柱壓升高時，用異丙醇-二氯甲烷（1:1）沖洗反相柱，或用純甲醇沖洗正相柱。
3.pH值控制：硅膠基質色譜柱的流動相pH值需保持在2.5-7.0之間，防止骨架溶解或鍵合相剝離。
通過嚴格執行上述規程，可確保賽默飛液相色譜儀在藥物分析、環境監測等領域持續輸出穩定可靠的數據，為科研工作提供堅實保障。
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