最近在使用工程化B細(xì)胞或腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞(TILs)的免疫療法中，B細(xì)胞的擴增引起研究人員越來越多的關(guān)注。目前用于B細(xì)胞擴增的方法效率低、時間長，并且會導(dǎo)致B細(xì)胞數(shù)量不足和T細(xì)胞持續(xù)衰竭。Adipogen推出的B-Xpander™蛋白通過模擬B細(xì)胞上CD40L和CD40分子之間的自然相互作用，改進了目前B細(xì)胞刺激方案。

B-Xpander™是一種有效的增強型多聚體人CD40L細(xì)胞因子，用于B細(xì)胞活化、B細(xì)胞擴增和細(xì)胞治療應(yīng)用。Adipogen使用專-利方法和經(jīng)鑒定并認(rèn)證的CHO細(xì)胞系進行生產(chǎn)，可提供類似GMP形式的具有超高活性的多聚體人CD40L蛋白。

B-Xpander™的特點：

• 使用經(jīng)過鑒定和認(rèn)證的可用于GMP級別生產(chǎn)的CHO細(xì)胞系進行生產(chǎn)

• 通過ELISA和基于細(xì)胞的檢測方法測試的高生物活性

• 通過SEC驗證具有高純度和均一性

• 低內(nèi)毒素水平

• 批次間一致性好

• 無動物成分來源

• 生產(chǎn)過程不使用交聯(lián)劑

B-Xpander™具有多聚體人CD40L蛋白的結(jié)構(gòu)，其中人CD40L胞外結(jié)構(gòu)域(aa 116-261)通過ACRP30的膠原結(jié)構(gòu)域人工連接。來自小鼠脂聯(lián)素的ACRP30無頭多聚化結(jié)構(gòu)域序列允許B-Xpander™的多聚化(10-12 x三聚體)。B-Xpander™非常有效地模擬了人CD40L在體內(nèi)的天然膜輔助聚集，是in vitro和 ex vivo應(yīng)用的理想選擇。

圖1.B-Xpander™或多聚體人CD40L的結(jié)構(gòu)

應(yīng)用實例

B 細(xì)胞擴增（增殖）

B-Xpander™與其他級別的多聚人CD40L一樣可以有效提升人原代CD19+ B細(xì)胞的增殖。與市場上大多數(shù)重組CD40L蛋白不同，Adipogen的B-Xpander™和多聚體CD40L蛋白不需要增強子(抗體)就能進行多聚體化和激活。

圖2. B細(xì)胞增殖檢測

通過人原代CD19+ B細(xì)胞的增殖來測定B-Xpander™和2種不同科研級別多聚體hCD40L的活性。細(xì)胞(5 x 10^4/孔)在RPMI培養(yǎng)基、谷氨酰胺、10%胎牛血清、人IL-4(10ng/ml)、人IL-21(10ng/ml)和不同濃度的B-Xpander™ CD40L (human) (rec.) (Animal-Free) (#AG-40B-0010AF)，CD40L (human) (multimeric) (rec.) (CSG; Certified Serum Grade) (#AG-40B-0010CSG), CD40L (human) (multimeric) (rec.) (#AG-40B-0010)，或?qū)φ盏鞍着囵B(yǎng)條件下。4天后使用PMS/MTS (ellTiter 96® AQueous One Solution Cell Proliferation Assay, Promega)對細(xì)胞增殖進行定量。4天后細(xì)胞擴增10倍，達到5×10^5/孔。

B 細(xì)胞激活

B-Xpander™也非常適用于B細(xì)胞的激活：B-Xpander的多聚體結(jié)構(gòu)模擬了膜結(jié)合人CD40L的生物活性，是一種高效的B細(xì)胞激活因子。B-Xpander是激活人類CD40的最-有效融合蛋白替代物。使用B-Xpander，不需要增強子(抗體) 就能實現(xiàn)多聚化和超高活性。

圖3.B-Xpander™ (Prod. No. AG-40B-0010AF)誘導(dǎo)B細(xì)胞活化。

將PBL細(xì)胞在96孔板(2x10^5 cells/孔，含10%FCS的100μl RPMI細(xì)胞培養(yǎng)基)中于37°C下培養(yǎng)24小時，培養(yǎng)液中含有指-定濃度的B-Xpander™ CD40L (human) (rec.) (Animal Free) (#AG-40B-0010AF), CD40L (human) (multimeric) (rec.) (#AG-40B-0010)或三聚體人CD40L作為對照。用PBS洗滌細(xì)胞，并分別用2μl CD86-PE和CD19-FITC（在50μl FACS緩沖液(PBS，5%FBS，0.02%疊氮化物)中）在4度避光條件下染色20分鐘。用FACS緩沖液洗滌兩次后，通過流式細(xì)胞儀分析樣品。

B細(xì)胞擴增在過繼性細(xì)胞治療中的作用

在ACT（Adoptive Cell Therapy，過繼細(xì)胞療法）過程中，從患者的血液或腫瘤組織中分離出T細(xì)胞，體外擴增和活化，然后重新輸回患者體內(nèi)，以靶向清除癌細(xì)胞。T細(xì)胞可以被改造成表達識別腫瘤特異性抗原的嵌合抗原受體(CARs)或T細(xì)胞受體(TCRs )，或者它們可以被擴增以富集具有天然腫瘤特異性反應(yīng)性的腫瘤浸潤性淋巴細(xì)胞(TILs, tumor-infiltrating lymphocytes)。然后，患者的腫瘤細(xì)胞可以與擴大的TILs相互作用，以篩選可以殺死腫瘤細(xì)胞的效應(yīng)TILs。

最近，研究者發(fā)現(xiàn)B細(xì)胞在ACT中是一個新的關(guān)鍵角色。TILs浸潤的B細(xì)胞越多，TIL的擴增和激活越好。用B-Xpander™刺激和擴增并裝載腫瘤特異性抗原的B細(xì)胞可提高腫瘤特異性TILs的數(shù)量。

圖4.TILs擴增的ACT工作流程

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