一、背景

營(yíng)養(yǎng)肉湯(NB)也被稱(chēng)為營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基或Nutrient Broth，是一種常用的細(xì)菌培養(yǎng)基，用于細(xì)菌的傳代、培養(yǎng)、轉(zhuǎn)種、復(fù)壯和增菌等。

營(yíng)養(yǎng)肉湯(NB)的主要成分包括蛋白胨、牛肉浸粉（或牛肉膏粉）和氯化鈉。其中，蛋白胨和牛肉浸粉為微生物生長(zhǎng)提供氮源、B族維生素、氨基酸和其他生長(zhǎng)因子，同時(shí)也提供碳源；氯化鈉則用于維持培養(yǎng)基的滲透壓。

在制備營(yíng)養(yǎng)肉湯(NB)時(shí)，需要將適量的培養(yǎng)基粉末溶解在蒸餾水中，并加熱溶解。然后，將溶液分裝到三角瓶或試管中，進(jìn)行高壓滅菌處理，備用。

營(yíng)養(yǎng)肉湯(NB)適合營(yíng)養(yǎng)需求較高的細(xì)菌的生長(zhǎng)，但不適用于苛養(yǎng)型微生物。它廣泛用于食品、牛奶、奶制品的微生物檢測(cè)，以及其他需要一般細(xì)菌培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)中。

營(yíng)養(yǎng)肉湯(NB)混合后微熱溶解，然后調(diào)整pH值至7.4-7.6，濾清后分裝并在116℃下滅菌30分鐘。滅菌后的營(yíng)養(yǎng)肉湯應(yīng)該是淡黃色透明無(wú)沉淀的溶液，pH值應(yīng)為7.2-7.4。這種培養(yǎng)基廣泛用于細(xì)菌的培養(yǎng)，尤其是那些需要豐富營(yíng)養(yǎng)才能良好生長(zhǎng)的細(xì)菌。

二、營(yíng)養(yǎng)肉湯的制備和使用需要遵循以下安全操作規(guī)范：

1、穿戴防護(hù)設(shè)備：在制備過(guò)程中，應(yīng)穿戴實(shí)驗(yàn)服、護(hù)目鏡、手套等防護(hù)設(shè)備，以防止培養(yǎng)基飛濺到皮膚或眼睛中。

2、確保實(shí)驗(yàn)環(huán)境清潔：實(shí)驗(yàn)環(huán)境應(yīng)保持清潔，以減少微生物污染的可能性。

3、無(wú)菌操作：制備營(yíng)養(yǎng)肉湯時(shí)應(yīng)確保所有使用的工具、容器和試劑都是無(wú)菌的。避免用手直接接觸培養(yǎng)基。

4、高壓滅菌：制備好的營(yíng)養(yǎng)肉湯應(yīng)經(jīng)過(guò)高壓滅菌處理，以殺死可能存在的細(xì)菌和其他微生物。

5、儲(chǔ)存條件：滅菌后的營(yíng)養(yǎng)肉湯應(yīng)儲(chǔ)存在適當(dāng)?shù)臈l件下，通常是在冷藏環(huán)境中。確保在有效期內(nèi)使用。

6、避免交叉污染：在使用營(yíng)養(yǎng)肉湯時(shí)，應(yīng)避免與其他實(shí)驗(yàn)材料或試劑發(fā)生交叉污染。例如，不要使用同一支移液管在不同類(lèi)型的培養(yǎng)基之間轉(zhuǎn)移液體。

7、處理廢棄物：使用后的培養(yǎng)基廢棄物應(yīng)按照實(shí)驗(yàn)室廢棄物處理規(guī)定進(jìn)行妥善處理。

8、遵守實(shí)驗(yàn)室規(guī)章制度：在制備和使用營(yíng)養(yǎng)肉湯時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室的規(guī)章制度和安全操作規(guī)范。

三、應(yīng)用

營(yíng)養(yǎng)肉湯(NB)可以用于抗菌塑料砧板抗菌性能的評(píng)價(jià)方法優(yōu)化及其應(yīng)用研究：

選擇常見(jiàn)的食品接觸材料制品“抗菌塑料砧板”為研究對(duì)象,主要探討了其抗菌性和抗菌耐久性相關(guān)的評(píng)價(jià)技術(shù)與方法,在此基礎(chǔ)上對(duì)市場(chǎng)上銷(xiāo)售的抗菌塑料砧板進(jìn)行了合格率調(diào)查,相關(guān)結(jié)果總結(jié)如下:

1、首先針對(duì)食品接觸材料抗菌性能貼膜法(GB/T 31402-2015)中接種液在陰性對(duì)照和空白對(duì)照培養(yǎng)24 h后菌落回收出現(xiàn)明顯增殖這一現(xiàn)象,研究了接種液中營(yíng)養(yǎng)肉湯濃度對(duì)貼膜法菌落回收的影響。結(jié)果顯示,試驗(yàn)菌種為金黃色葡萄球菌和大腸桿菌時(shí),菌液制備用營(yíng)養(yǎng)肉湯(NB)的濃度比分別為1/500和1/1000,相比原國(guó)標(biāo)法大腸桿菌的接種液濃度為1/500營(yíng)養(yǎng)肉湯(1/500NB),本實(shí)驗(yàn)改進(jìn)的方法更能保障測(cè)試結(jié)果的準(zhǔn)確。

2、分別采用原國(guó)標(biāo)法及本實(shí)驗(yàn)改進(jìn)的國(guó)標(biāo)法對(duì)20種抗菌塑料砧板進(jìn)行抗菌性能評(píng)價(jià),驗(yàn)證改進(jìn)方法的有效性。營(yíng)養(yǎng)肉湯(NB)結(jié)果顯示,13種抗菌塑料砧對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌都有抗菌作用,抗菌率都>90%,其余7種抗菌率<90%為不合格產(chǎn)品,合格率僅為65%,這說(shuō)明市售抗菌塑料砧板的抗菌合格率總體偏低,應(yīng)進(jìn)一步加強(qiáng)管理,引導(dǎo)抗菌塑料砧板產(chǎn)業(yè)加強(qiáng)技術(shù)研發(fā),提高抗菌效果。營(yíng)養(yǎng)肉湯(NB)數(shù)據(jù)表明抗菌效果與砧板銀離子濃度相關(guān),要實(shí)現(xiàn)90%以上抗菌率,銀離子濃度基本要達(dá)到25 mg/Kg以上,而當(dāng)銀離子濃度>40 mg/Kg時(shí),抗菌率均高于99.99%。此外,數(shù)據(jù)顯示相對(duì)于國(guó)標(biāo)法,改進(jìn)的方法更嚴(yán)格、準(zhǔn)確,20種受試砧板對(duì)大腸桿菌的抗菌合格率為70%,而國(guó)標(biāo)法對(duì)大腸桿菌的抗菌合格率為80%。

3、對(duì)市售的兩種納米銀抗菌塑料砧板用改進(jìn)的國(guó)標(biāo)法進(jìn)行抗菌性能評(píng)價(jià),結(jié)果表明,兩種納米銀抗菌塑料砧板對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄球菌都具有抗菌效果,抗菌性能值都>3.00,但較低濕度下大部分的細(xì)菌會(huì)干燥死亡。當(dāng)使用正常濃度的營(yíng)養(yǎng)肉湯(NB)制備的菌懸液用于測(cè)試時(shí),納米銀抗菌塑料砧板表現(xiàn)出弱的甚至無(wú)抗菌作用。表皮葡萄球菌,沙門(mén)氏菌,沙雷氏菌和單核細(xì)胞增生李斯特菌等4種食源細(xì)菌接種實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,納米銀抗菌塑料砧板在正常濃度NB和高濕度下抗菌效果并不理想。與實(shí)際的食物使用情況相比,標(biāo)準(zhǔn)貼膜試驗(yàn)可能會(huì)高估納米銀抗菌塑料砧板的抗菌效果。

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