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耗材專區(qū) | Empore™ C18 96孔板在肽段脫鹽過程中的應(yīng)用
01
Empore™ C18 96孔板簡介
Empore™ C18膜式固相萃取96孔板專為高通量固相萃取而設(shè)計，板的每個孔內(nèi)都有一個有效直徑為5.5mm的C18固相萃取膜，固相萃取膜和其上方的預(yù)過濾層被壓環(huán)固定到每個孔的底部，預(yù)過濾層可有效提高大多數(shù)生物樣品前處理流速。有效直徑是指可用于樣品處理的萃取膜實際使用直徑。標(biāo)準(zhǔn)板的單孔儲液體積為1.2mL，深孔板的單孔儲液體積為2.5mL。如果樣品或試劑的體積超過板的單孔儲液體積，可分批次加液。
02
Empore™ C18 96孔板技術(shù)優(yōu)勢
高通量、低樣本損失、兼容自動化設(shè)備。 致密且穩(wěn)定的膜結(jié)構(gòu)消除了散裝填料孔板中存在的溝流和孔洞的問題，數(shù)據(jù)重現(xiàn)性更高。 薄薄的膜結(jié)構(gòu)更易被洗脫，回收率更高。
03
C18 96孔板脫鹽原理
C18鍵合相（十八烷基硅烷）通過疏水相互作用吸附肽段，去除鹽分、去垢劑等雜質(zhì)，隨后用有機(jī)溶劑洗脫肽段，實現(xiàn)脫鹽和濃縮。
04
實驗前準(zhǔn)備
CDS Empore™ C18 96孔板（貨號：70-2007-3982-2EA，規(guī)格：6015 C18-SD PLATE, 1.2mL, 1PCS） -
緩沖液：
活化/平衡液：0.1%三氟乙酸（TFA）水溶液;
洗滌液：0.1% TFA/5%乙腈（ACN）;
真空抽濾裝置或離心機(jī)（適配96孔板） 肽段樣本（酶解后的復(fù)雜混合物）
2、板預(yù)處理
-
活化：每孔加入200μL 100% ACN，靜置1分鐘，抽干。
-
平衡：每孔加入200μL 0.1% TFA，重復(fù)2次，確保填料親水化。
05
脫鹽步驟
將肽段樣本（溶于0.1% TFA）加入孔中。 注意：樣本pH需≤3（TFA調(diào)節(jié)），以增強(qiáng)肽段與C18的結(jié)合。
每孔加入200μL洗滌液（0.1% TFA/5% ACN），重復(fù)2-3次，去除鹽分和極性雜質(zhì)。 真空抽干或離心去除液體。
加入50-100μL洗脫液（如0.1% TFA/50% ACN），靜置1分鐘，收集洗脫液至收集板。 可重復(fù)洗脫1次以提高回收率。
合并洗脫液，真空離心干燥（如SpeedVac）后溶于質(zhì)譜上樣緩沖液（如0.1%甲酸）。
06
關(guān)鍵參數(shù)優(yōu)化
手動操作時避免流速過快（依賴重力或離心）；自動化平臺可調(diào)至1mL/ min。
洗脫ACN濃度需優(yōu)化（通常50-80%），過高可能導(dǎo)致疏水性雜質(zhì)共洗脫。
避免超載（肽段載量：100μg左右/孔），否則會導(dǎo)致回收率低。
07
應(yīng)用場景
去除LC-MS/MS樣本中的鹽（如SDS、尿素、磷酸鹽）。
與高pH反相分餾聯(lián)用，提高肽段覆蓋度。
適配液體處理工作站(如Labtech EmporeOmics、Tecan、Hamil-ton) 實現(xiàn)高通量。
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