同位素內標(Isotope-labeled Internal Standard, ILIS)通過引入與目標分析物化學結構高度相似但含有穩定同位素標記(如²H、¹³C、¹?N、¹?O等)的內標物,校正分析過程中的誤差,提升定量準確性。
其核心原理在于,通過改造核酸或蛋白質,將同位素標記的探針引入系統。這些探針能夠與生物體內的目標分子結合,利用雙向結合的策略,通過專門的分析技術,解析出宿主與同位素的相互作用,揭示出生物體的內在機制和環境響應的秘密。
同位素內標法的步驟清晰而有序:先引入標記有抗體或抗原的同位素探針;接著,經過反應與聚集,形成活性化合物;后儀器準確檢測這些反應的強度或細胞表型變化,繪制出反映生物體動態變化的曲線圖,為研究提供深度洞見。
同位素內標在生物醫學、環境分析、食品安全、臨床診斷等領域具有廣泛應用,通過校正基質效應和前處理損失,明顯提高定量分析的準確性和可靠性。未來,隨著同位素標記技術和質譜分析方法的發展,同位素內標將在更多領域發揮關鍵作用。
注意事項
內標物的驗證:需通過色譜保留時間、質譜碎片離子等信息確認內標物與目標分析物的分離效果。
同位素豐度的校正:高豐度的同位素標記可提高定量準確性。
內標濃度的優化:內標濃度應與目標分析物的預期濃度范圍相匹配,避免過高或過低導致定量誤差。
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