人生長分化因子15(GDF15)ELISA試劑盒技術解析與應用指南
上海仁捷生物科技有限公司
摘要
人生長分化因子15(Growth Differentiation Factor 15,GDF15)是一種重要的細胞應激反應蛋白,在多種病理生理過程中發揮關鍵作用。本文詳細介紹了上海仁捷生物科技有限公司自主研發的GDF15 ELISA試劑盒的技術原理、性能參數、操作流程及典型應用案例,為研究人員提供全面的技術參考。
1. 產品概述
1.1 GDF15生物學意義
GDF15屬于TGF-β超家族成員,又稱MIC-1(macrophage inhibitory cytokine-1),具有以下重要功能:
調控能量代謝平衡
參與炎癥反應
影響腫瘤發生發展
與心血管疾病密切相關
1.2 上海仁捷GDF15 ELISA試劑盒特點
高靈敏度:檢測下限達10 pg/mL
寬檢測范圍:50-1600 pg/mL
優異特異性:不與TGF-β家族其他成員交叉反應
穩定可靠:批內變異系數<8%,批間變異系數<10%
多種樣本適用:血清、血漿、細胞培養上清等
2. 技術原理
2.1 雙抗體夾心ELISA原理
本試劑盒采用經典雙抗體夾心法:
包被:高親和力抗GDF15單抗預包被于微孔板
結合:樣本中GDF15與包被抗體特異性結合
檢測:加入生物素標記的二抗
信號放大:鏈霉親和素-HRP復合物結合
顯色:TMB底物顯色反應
2.2 檢測系統優化
抗體配對:經過嚴格篩選的高效抗體對
信號放大:生物素-親和素放大系統
干擾控制:特殊緩沖體系降低基質效應
3. 實驗操作指南
3.1 樣本處理建議
樣本類型 | 處理方法 | 注意事項 |
---|---|---|
血清 | 室溫凝固30min后,2000×g離心15min | 避免溶血 |
血漿 | EDTA抗凝,離心去除血小板 | 及時分離 |
細胞上清 | 0.22μm濾膜過濾 | 避免反復凍融 |
3.2 標準操作流程
試劑準備(室溫平衡30min)
加樣(標準品/樣本各100μL)
37℃孵育90min
洗板(自動洗板機推薦)
加檢測抗體(100μL/孔)
37℃孵育60min
洗板
加酶結合物(100μL/孔)
37℃孵育30min
洗板
顯色(TMB,15min)
終止反應
450nm讀數
3.3 數據分析
四參數擬合標準曲線
質控要求:R2≥0.99
推薦使用專業ELISA分析軟件
4. 典型應用案例
4.1 心血管疾病研究
案例:急性心肌梗死患者血清GDF15動態監測
方法:收集50例AMI患者發病后0、6、12、24、48h血清樣本
結果:GDF15水平在發病6h顯著升高,與心肌損傷程度正相關(r=0.72)
4.2 腫瘤研究
案例:結直腸癌患者預后評估
方法:檢測120例患者術前血清GDF15水平
結果:高GDF15組(>200pg/mL)5年生存率顯著低于低水平組(38% vs 72%)
4.3 代謝性疾病研究
案例:2型糖尿病肥胖患者干預研究
方法:檢測生活方式干預前后GDF15變化
結果:有效減重組GDF15下降幅度顯著(P<0.01)
5. 常見問題解決方案
5.1 技術問題排查
問題現象 | 可能原因 | 解決方案 |
---|---|---|
標準曲線不佳 | 標準品溶解不充分 | 充分震蕩混勻 |
背景值高 | 洗板不充分 | 增加洗滌次數 |
重復性差 | 操作不一致 | 統一操作手法 |
5.2 結果解讀要點
注意樣本采集時間(晝夜節律影響)
考慮藥物干擾(如二甲雙胍可升高GDF15)
結合臨床其他指標綜合分析
6. 產品服務支持
6.1 上海仁捷特色服務
免費技術咨詢:專業團隊提供實驗設計指導
方法學驗證服務:協助完成方法學比對
定制化服務:可根據需求調整檢測范圍
關鍵詞:GDF15、ELISA試劑盒、上海仁捷生物、心血管標志物、腫瘤標志物、代謝調控
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