做Western Blot雜帶多?免疫熒光背景像星空?ELISA檢測總翻車?
別急著懷疑自己的手!可能是你的抗體沒選對!
今天手把手教你避坑,輕松get靠譜抗體選擇技巧!
?【選抗體必看3步法】
??Step 1:明確靶標
?? 了解待測靶標:在uniprot查詢待測蛋白信息,包括名稱、分子量、陽性組織/細胞種類、亞細胞定位等。
??實驗應用目的:研究靶蛋白細胞定位可選IHC/IF;研究靶蛋白是表達或定量可選WB,ELISA。
??實驗樣本:明確實驗樣本,選擇合適的陽性對照。
??Step 2:了解抗體信息
?? 抗體名稱(Antibody name): 含靶蛋白名稱,磷酸化抗體含磷酸化位點;
??抗體貨號(Catalog number): 抗體獨*無*標記,相同貨號抗體也會有不同批次號,如需重復實驗的,選同一批號抗體。
??宿主(Host): 抗體來源物種,常見有Rabbit, Mouse, Human,等,避免選擇與樣本物種相同來源的抗體,防止同源高背景。
??克隆類型(Clonality): 多克隆(Polyclonal)多抗原表位,親和性高,有利信號放大,適用表達水平低和抗原微小修飾的檢測;單克隆(Monoclonal)單一抗原表位,特異性高,批次一致性高,適用要求高特異性和重復實驗的研發。
??檢測應用 (Tested applications): 抗體檢測過的實驗類型比如WB, IHC,ELISA等,根據實驗需要選擇。
??反應物種(Reactivity): 抗體檢測過的物種,確保里面包含待測樣本的物種。
??免疫原(Immunogen): 包含多肽和重組蛋白,多肽片段短,獲得的抗體特異性一般沒有重組蛋白作為免疫原的高,比較抗體免疫原的Uniprot ID信息,是否是你要測的目的蛋白。
??抗體檢測結果圖:非常重要,根據抗體檢測結果可以分辨抗體的特異性和物種適應性,有些抗體還提供敲除/敲低樣本驗證圖,多物種交叉反應數據的更優。
??其他考慮因素:抗體價格或貨期,售后服務有保障。
??Step 3:小樣測試
??購買小規格進行小樣測試;
??建議先跑陽性對照,摸索**抗體稀釋比例。
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