蛋白印跡儀(Western Blot System)是一種用于檢測和分析特定蛋白質的實驗設備。其原理包括聚丙烯酰胺凝膠電泳(分離蛋白質)、轉膜(將蛋白質轉移到固相載體,如NC膜或PVDF膜)、抗體孵育(特異性抗體與目標蛋白結合)、顯色反應(標記的二抗與底物反應,顯示目標蛋白)。
蛋白印跡儀廣泛應用于生物醫學研究(如蛋白質表達分析、細胞信號通路研究)、臨床診斷(如HIV感染確認、自身免疫性疾病檢測)、藥物研發(如生物標志物發現、蛋白質相互作用研究)等領域。其優勢在于高靈敏度和特異性,能夠定量和定性分析蛋白質。
使用規范與注意事項:
1、實驗準備:
樣本需充分裂解,定量后上樣(避免過載導致條帶模糊)。
預制膠需平衡至室溫,避免冷凝水影響電泳。
2、轉膜優化:
PVDF膜需甲醇激活,NC膜需緩沖液浸潤。
轉膜時間根據蛋白分子量調整(如100kDa蛋白需1.5小時)。
3、抗體孵育:
一抗濃度需預實驗確定,4℃過夜孵育效果佳。
二抗需避光保存,現用現配。
4、設備維護:
定期清潔電泳槽和轉印電極,防止蛋白殘留。
校準成像系統的光強和曝光時間,確保定量準確性。
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