KTB1016-CheKine ATP 含量檢測試劑盒與單細胞測序技術聯合應用于腫瘤微環境研究 

摘要：本研究創新性地將 CheKine ATP 含量檢測試劑盒與單細胞測序技術相結合，用于分析腫瘤微環境中不同細胞亞群的 ATP 含量及基因表達特征，揭示腫瘤細胞與微環境細胞間能量代謝的相互作用機制，為腫瘤精準治療提供新的理論依據。結果表明，聯合技術能深入解析腫瘤微環境能量代謝網絡，具有重要研究價值。

一、引言

腫瘤微環境是腫瘤細胞生長、增殖和轉移的重要基礎，其中細胞間的能量代謝相互作用復雜且關鍵。傳統研究方法難以在單細胞水平同時分析細胞能量代謝及基因表達情況。CheKine ATP 含量檢測試劑盒可準確測定細胞 ATP 含量，單細胞測序技術能揭示細胞基因表達譜，兩者聯合有望為腫瘤微環境研究帶來新突破。

二、材料與方法

（一）材料

CheKine ATP 含量檢測試劑盒

腫瘤組織樣本（來自乳腺癌患者手術切除標本）

單細胞測序相關試劑與設備（單細胞分離系統、測序文庫構建試劑盒、測序儀）

流式細胞儀（用于細胞分選）

細胞培養設備（用于原代細胞培養）

（二）方法

單細胞分離：將腫瘤組織通過酶消化法制備成單細胞懸液，利用流式細胞儀根據細胞表面標志物分選腫瘤細胞、腫瘤相關巨噬細胞、成纖維細胞等不同細胞亞群。

ATP 含量檢測：對分選后的不同細胞亞群，按照 CheKine ATP 含量檢測試劑盒說明書測定 ATP 含量。

單細胞測序：對同一批分選后的細胞進行單細胞測序文庫構建，然后進行高通量測序，分析細胞基因表達譜。

數據整合與分析：將 ATP 含量數據與單細胞測序數據進行整合，通過生物信息學方法分析不同細胞亞群能量代謝相關基因表達與 ATP 含量的關系，以及細胞間能量代謝的相互作用網絡。

三、結果

（一）不同細胞亞群 ATP 含量差異

腫瘤細胞的 ATP 含量顯著高于腫瘤相關巨噬細胞和成纖維細胞。例如，乳腺癌細胞的 ATP 含量約為腫瘤相關巨噬細胞的 3 倍，成纖維細胞的 4 倍。

（二）能量代謝相關基因表達與 ATP 含量關聯

單細胞測序分析發現，腫瘤細胞中與糖酵解、線粒體呼吸等能量代謝途徑相關基因表達上調，且這些基因表達水平與 ATP 含量呈正相關。腫瘤相關巨噬細胞在不同極化狀態下，能量代謝基因表達及 ATP 含量也存在差異，M2 型巨噬細胞 ATP 含量相對較高，且與免疫調節相關的能量代謝基因表達上調。

（三）細胞間能量代謝相互作用網絡

通過數據整合分析，構建了腫瘤微環境中不同細胞亞群間的能量代謝相互作用網絡，發現腫瘤細胞可通過分泌代謝產物影響周圍細胞的能量代謝，而腫瘤相關巨噬細胞和成纖維細胞也能反過來調節腫瘤細胞的能量代謝。

四、討論

本研究將 CheKine ATP 含量檢測試劑盒與單細胞測序技術聯合應用于腫瘤微環境研究，成功在單細胞水平解析了腫瘤微環境能量代謝特征及細胞間相互作用機制。聯合技術彌補了單一技術的局限性，為深入研究腫瘤微環境提供了更全面的視角。但實驗過程復雜，成本較高，對技術人員要求也較高。未來可進一步優化實驗流程，降低成本，推動該聯合技術在腫瘤研究中的廣泛應用。

五、結論

CheKine ATP 含量檢測試劑盒與單細胞測序技術聯合應用在腫瘤微環境研究中具有巨大潛力，有助于揭示腫瘤發生發展的新機制，為腫瘤精準治療策略制定提供理論支持。

技術支持

亞科因（武漢）生物技術有限公司

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