很多想使用Lonza核轉設備的小伙伴常常會遇到想做電轉但是無從下手的情況。有些小白不知道怎么做，也不知道應該準備些什么。那么針對這些問題，小編上次為大家整理了一些挑選試劑盒和試驗條件的攻略，如有需要請戳下方鏈接查看：

Lonza 4D-核轉儀器試驗操作全流程攻略（1）——如何選擇需要的試劑盒和程序

那么接下來，給大家再介紹一下4D核轉儀器的操作流程。大家可以根據以下流程去著手實驗啦，有問題可以在評論區提問哦！

電穿孔是一種常用的物理轉染方法。電轉染是在瞬間強大電場的作用下把外源大分子物質DNA、RNA、siRNA、蛋白質等以及一些小分子導入細胞膜內部的一個過程。其原理為：細胞和DNA懸浮在電穿孔緩沖液中，對細胞施加高壓脈沖，電脈沖在細胞膜上產生電位差，使膜產生了一定的通透性，以便DNA進入。電轉染是一種非常普遍且高效的轉染方法，可用于幾乎所有的細胞類型的轉染。

電轉染整體操作簡單迅速，想要做好電轉試驗，那么試驗前后的準備工作，具體流程小編以文字形式整理如下，文章末附流程圖。

*注：本方案為個人整理，試驗具體的方案及細節請參考Lonza提供的Protocol。

實驗準備

1. 我們需要根據的細胞信息確定我們的細胞適合的程序代碼、細胞數、試劑盒等相關信息。

2. 在試驗前，需要根據試驗的樣品數量準備試劑耗材、其中用來后續使用的培養基和培養板需要進行37℃進行預熱。

3. 將試劑盒孵育至室溫，并將試劑盒內的solution與supplement按照4.5：1的比例混合均勻。

4. 提前準備好對數生長期的細胞（具體培養方案可參考查到的protocol）。

5. 將儀器開機并設置好程序。

開始實驗

1. 將細胞處理成單細胞懸液，選取所需細胞進行離心。注意消化時間與離心力。

2. 離心過后，小心吸取上層培養基，盡量吸取干凈，并用配置好的電轉buffer重懸細胞。

3. 加入電轉底物：質粒、RNP、RNA等。并混合均勻。（RNP比質粒體積小很多，對于大質粒可以考慮RNP體系，文末附解決方案）

4. 將混勻的液體加入到電轉的耗材中，應該注意的是，加完的液體應該在容器底部，內部和上方沒有氣泡，且液面兩端高度一致，與容器底物保持平行。

5. 整體試驗流程盡量快一些，樣品檢查無誤后，直接上機。

實驗后處理

• 將電轉后的耗材從儀器中取出。

• 輕柔加入預熱的培養基，混勻細胞。。

• 將混勻的液體加入到最終的培養板中并補全培養體系。

Lonza 電轉流程

關于儀器操作流程介紹就到這里，各位小伙伴如果查詢過程中遇到問題歡迎及時聯系我們并積極留言。【掃描文末二維碼，提交服務需求】

Lonza 4D-核轉染系統

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