1、目的

探討非最終滅菌注射劑生產(chǎn)過程中除菌過濾器對微生物的截留效果，確認(rèn)過濾除菌工藝的有效性與安全性。

2、方法

采用孔徑為0.22 μm除菌級聚醚砜濾芯，以直徑在0.3～0.4 μm的缺陷假單胞菌為生物指示劑，將菌液用濾芯過濾，計算被過濾液體過濾前的微生物數(shù)量與過濾后的微生物數(shù)量比的常用對數(shù)值(LRV)。

3、結(jié)果

菌液過濾前后微生物數(shù)量比的常用對數(shù)值LRV大于7。

4、結(jié)論

濾芯每平方厘米有效過濾面積符合中國藥典2005年版2部附錄ⅩⅦ滅菌法的規(guī)定，確認(rèn)除菌過濾工藝在注射劑生產(chǎn)過程中的有效性與安全性。  

除菌過濾器在藥品生產(chǎn)中主要用于無菌藥品的除菌過濾，除菌過濾是藥品生產(chǎn)過程中非常重要的一種除菌方式，特別是對非最終滅菌的注射劑而言，除菌過濾是消除藥液中微生物的方法。通過對除菌過濾器濾芯材質(zhì)的選擇、滅菌方法、完整性測試以及細(xì)菌的截留試驗，確認(rèn)除菌的效果，提高除菌過濾在注射劑生產(chǎn)過程中無菌保證程度重要性的認(rèn)識。

一、材料與方法

1、試驗材料

(1)濾芯：濾膜材質(zhì)為聚醚砜，10英寸226卡式，孔徑：0.22 μm，級別：除菌級，濾膜面積：3 600 cm2。來源：頗爾過濾器(北京)有限公司。(2)全自動過濾器完整性測試儀：上海先維過濾設(shè)備廠，型號：212A。(3)甘露醇：廣西南寧化學(xué)制藥有限公司，批號：0809110，配置20 kg 濃度為0.5%的水溶液。(4)微生物指示劑：缺陷假單孢菌(ATCC19146直徑0.3～0.4 μm)，北京鑫四環(huán)消毒技術(shù)開發(fā)中心。(5)菌液濃度：每平方厘米應(yīng)達(dá)到107個菌的挑戰(zhàn)水平。(6)培養(yǎng)基：硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基：北京三藥科技開發(fā)公司，批號:081111；營養(yǎng)瓊脂：廣東環(huán)凱微生物科技有限公司，批號:200902081；營養(yǎng)肉湯：廣東環(huán)凱微生物科技有限公司，批號:200901071。(7)試驗壓力：約為0.2 Mpa。(8)試驗流量：筒式過濾器2～3.86L/(m3·min)。

2、方法

1.2.1 濾芯的清洗  

將濾芯浸泡于0.1%氫氧化鈉溶液中12～24 h，取出用注射用水反復(fù)沖洗至沖洗水的pH值呈中性。

1.2.2 完整性測試  

將過濾器與完整性測試儀連接，向經(jīng)過注射用水充分浸潤的過濾器(含濾芯)中通入壓縮空氣，觀察壓力表讀數(shù)的變化，當(dāng)浸入液面下的導(dǎo)管出口處出現(xiàn)第1個氣泡時，讀取壓力表指示值，此壓力值即為濾器濾芯的起泡點(diǎn)壓力，壓力要求≥0.31 Mpa。

1.2.3 缺陷假單胞菌液的制備  

取缺陷假單胞菌的新鮮培養(yǎng)物少許，接種至營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，于(32.5±2.5)℃培養(yǎng)18～24 h，活菌計數(shù)將上述培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液制成含菌<100 CFU/mL的菌液，稀釋級別：107，計數(shù)結(jié)果：27 CFU/mL。

1.2.4 微生物截留試驗  

(1)過濾系統(tǒng)滅菌：將試驗所需的不銹鋼桶、硅膠管、過濾器及濾芯等置于脈動真空滅菌器中于121 ℃滅菌30 min。(2)對照試驗：取1 000 mL甘露醇溶液(0.5%)用無菌過濾器壓濾，各取2份樣品，分別用薄膜過濾法處理后，一份作陰性對照，另一份在最后1次沖洗液中加入缺陷假單胞菌菌液1 mL(<100 CFU/mL),取濾膜置于硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基中培養(yǎng)作為陽性對照，對照試驗培養(yǎng)(33 ℃,14 d)均符合規(guī)定。(3)截留試驗：將缺陷假單胞菌液360 mL加入余量0.5%甘露醇溶液中攪拌均勻，取1 mL按中國藥典2005年版2部附錄Ⅺ J微生物限度檢查法進(jìn)行檢查，計數(shù)過濾前液體的微生物數(shù)量。然后將菌液全部用過濾器濾過，取1 000 mL按過濾前藥液微生物數(shù)量檢查法同法操作，計數(shù)過濾后的液體的微生物數(shù)量。計算被過濾液體過濾前的微生物數(shù)量(N0)與過濾后的微生物數(shù)量(N)比的常用對數(shù)值,即：LRV=1gN01gN=7.8。(4)過濾后濾器的完整性測試將過濾之后的除菌濾器再次進(jìn)行起泡點(diǎn)測試，確認(rèn)試驗過程中濾膜的完整性。

二、結(jié)果

藥液過濾前的微生物的數(shù)量與藥液過濾后的微生物數(shù)量比的常用對數(shù)值為7.8，大于標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定值7，結(jié)果見表1。證明除菌級濾芯可達(dá)到每平方厘米107個菌的截留效果，符合非最終滅菌注射劑的生產(chǎn)工藝要求。表1  微生物截留試驗結(jié)果（略）

三、討論

除菌過濾器微生物截留試驗結(jié)果表明，孔徑為0.22 μm除菌級濾芯對微生物的截留試驗可達(dá)到LRV大于7的微生物截留效果，達(dá)到除菌的目的。但是與其他滅菌方法相比，除菌過濾的風(fēng)險，實(shí)際生產(chǎn)中宜安裝第2只已滅菌的除菌過濾器再過濾1次藥液，最終的除菌過濾器應(yīng)盡可能接近灌裝點(diǎn)。因此，對于采用除菌過濾和無菌生產(chǎn)工藝生產(chǎn)的注射劑產(chǎn)品，在除菌過濾時，被過濾產(chǎn)品總的微生物污染量應(yīng)控制在規(guī)定的限度內(nèi)。要達(dá)到這一目的，應(yīng)在無菌控制的環(huán)境下進(jìn)行過濾操作，相關(guān)的設(shè)備、包裝容器、膠塞及其他物品應(yīng)采用適當(dāng)?shù)姆椒ㄟM(jìn)行滅菌，并防止再次污染。對生產(chǎn)用原輔料還應(yīng)進(jìn)行微生物限度的檢查，以降低其微生物負(fù)載率，通過整個生產(chǎn)過程的嚴(yán)格控制，采用經(jīng)驗證確認(rèn)的除菌過濾和無菌生產(chǎn)的工藝，產(chǎn)品的無菌是能夠得到保證的。

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