摘要本應(yīng)用簡(jiǎn)報(bào)介紹了一種簡(jiǎn)便的樣品前處理方法，結(jié)合 Agilent 1290 Infinity II LC 和Agilent 6470A 三重四極桿液質(zhì)聯(lián)用系統(tǒng)對(duì)食品基質(zhì)中的多類(lèi)生物堿進(jìn)行高通量測(cè)定。采用基質(zhì)匹配校準(zhǔn)標(biāo)樣進(jìn)行校正，發(fā)現(xiàn)在稀釋的面包、牛奶、葡萄酒和米粉提取基質(zhì)中，18 種生物堿在 0.50–50.0 µg/L 濃度范圍內(nèi)具有非常好的線性?？紤]到10 倍的稀釋倍數(shù)，這相當(dāng)于基質(zhì)中 5.0–500 µg/kg。所有分析物的線性回歸系數(shù)均大于 0.995。在 0.5 µg/L 的低校準(zhǔn)濃度下（相當(dāng)于樣品中 5.0 µg/kg），所有分析物的信噪比 (S/N) 均大于 10。在濃度為 5、50 和 250 µg/kg 的四種不同基質(zhì)中，分析物回收率范圍為 90%–110%，相應(yīng)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差在 2.3%–7.9% 之間。結(jié)果表明，該方法具有很高的靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度。這種簡(jiǎn)單的樣品前處理與快速LC/MS/MS 檢測(cè)相結(jié)合的方法可以用于食品基質(zhì)中多類(lèi)生物堿殘留的高通量篩查。

前言生物堿是一類(lèi)具有含氮雜環(huán)結(jié)構(gòu)的天然堿性物質(zhì)。它們通常表現(xiàn)出很高的生物活性，是中藥的主要成分。生物堿存在于一些植物中，意外攝入可能會(huì)造成有害影響[1]。根據(jù)歐盟法規(guī) 2016/239 (EU)，某些嬰幼兒谷類(lèi)食品中的莨菪烷生物堿（包括阿托品和東莨菪堿）的最大殘留量 (MRL) 低至 1 µg/kg[2]。在歐盟No. 37/2010 (EU) 法規(guī)中，把秋水仙堿列入了禁止清單[3]。中國(guó)允許在所有動(dòng)物源性食品基質(zhì)中使用阿托品，并且未規(guī)定MRL，國(guó)內(nèi)也沒(méi)有其它法規(guī)對(duì)食品基質(zhì)中生物堿的含量進(jìn)行限制[4]。然而，含生物堿的雜草意外混入農(nóng)作物或家畜意外攝入含生物堿的雜草可能增加公眾的暴露風(fēng)險(xiǎn)。因此，建立靈敏可靠的方法對(duì)食品基質(zhì)中的生物堿進(jìn)行常規(guī)監(jiān)測(cè)至關(guān)重要。事實(shí)上，生物堿的物理化學(xué)性質(zhì)差異很大，并且還涉及許多復(fù)雜的基質(zhì)。開(kāi)發(fā)一種可靠的方法來(lái)同時(shí)監(jiān)測(cè)多種生物堿面臨著較大的挑戰(zhàn)?，F(xiàn)有的報(bào)道主要集中在具有相似化學(xué)性質(zhì)的生物堿的同時(shí)檢測(cè)[5,6]。本應(yīng)用簡(jiǎn)報(bào)提供了一種簡(jiǎn)單的樣品前處理方法，結(jié)合快速 LC/MS/MS 方法，實(shí)現(xiàn)對(duì)牛奶、葡萄酒、面包和米粉等 4 種食品基質(zhì)中的 5 類(lèi)共 18 種生物堿的同時(shí)高通量測(cè)定。

實(shí)驗(yàn)部分標(biāo)樣制備和樣品前處理步驟所有 5 類(lèi)共 18 種生物堿化合物均購(gòu)自安譜科技公司（中國(guó)上海），用甲醇配制為1.0 g/L 的儲(chǔ)備液，于 –20 °C 下保存。然后用相應(yīng)的基質(zhì)提取物稀釋儲(chǔ)備液，得到校準(zhǔn)標(biāo)樣溶液。將固體樣品 (2.0 g) 加入 50 mL 離心管中，然后加入 5 mL 水進(jìn)行水化。再加入10 mL 乙腈，接著加入 5 mL Na2EDTAMcllvaine 緩沖液 (pH 3)。將離心管充分渦旋混合 2 分鐘，然后在 7500 rpm 的轉(zhuǎn)速下離心 5 分鐘。收集上清液，經(jīng) 0.22 µm膜過(guò)濾后，用 LC/MS 進(jìn)行分析。液體樣品（如牛奶和葡萄酒）遵循相同的萃取程序，只是省去初始水化步驟

液相色譜系統(tǒng)Agilent 1290 Infinity II 液相色譜儀，配備如下模塊：• Agilent 1290 Infinity II 二元泵，內(nèi)置脫氣機(jī)• Agilent 1290 Infinity II 自動(dòng)進(jìn)樣器，帶針座反沖功能• Agilent 1290 Infinity II 高容量柱溫箱

結(jié)果與討論生物堿在酸性條件下很容易被質(zhì)子化。因此，實(shí)驗(yàn)選擇 ESI 正離子電離下的MRM 掃描模式。實(shí)驗(yàn)中考察了不同的流動(dòng)相組合，包括水/甲醇、水/乙腈、0.1% 甲酸/甲醇和 0.1% 甲酸/乙腈。大多數(shù)生物堿在甲醇中比在乙腈中的響應(yīng)更好。在酸化水中，色譜峰更窄、更對(duì)稱(chēng)且強(qiáng)度更高；而在非酸化水中，觀察到峰拖尾且強(qiáng)度較低。因此，最終選擇酸化的水/甲醇作為二元流動(dòng)相。然后，在所選流動(dòng)相條件下對(duì) MRM 參數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化。表 1 列出了得到的參數(shù)。對(duì)于那些色譜上未能得到理想分離的化合物，通過(guò)其特征 MRM 離子對(duì)可實(shí)現(xiàn)對(duì)化合物的準(zhǔn)確定量。圖 1 顯示了來(lái)自不同類(lèi)別的 18 種生物堿的典型 MRM 疊加色譜圖。