前  言

免疫原性風險評估是生物藥物開發的重要組成部分。多特異性抗體在治療方面表現出特異性好、選擇性好等特性，但由于其結構組成、大小、是否含有Fc及靶點結合親和力等因素，容易產生免疫原性，且風險評估挑戰大。

01多特異性抗體的免疫原性來源

序列注意事項

氨基酸序列和T細胞表位含量是產生免疫反應風險的主要因素。多特異性療法采用多種蛋白質工程技術，以非天然方式將特定的結構域匯集在一起，以便同時進行多靶點識別，例如knobs-in-holes、CrossMAb、Triomab、SEED、CODV、DART®、TRIDENT、BiTE®、BiKE、TriKE、MATCH、nanobody、diabody、diabody-Ig等。

這類設計和優化的單價或多價的抗體藥可能會增加抗體分子的免疫原性。例如，使用抗體片段和接頭分子可能導致產生全長親本抗體中不存在的新表位，或暴露隱藏在親本抗體結構中的隱藏表位。與親本抗體相比，這些表位可能會增加雙特異性抗體的免疫原性風險。

關鍵質量屬性（CQA）

CQA風險因素也與多特異性抗體相關，如蛋白質聚集體、翻譯后修飾、宿主細胞和工藝相關雜質（如HCP、HCD、內毒素、色譜樹脂、污染物和降解物等）、制劑賦形劑和容器封閉等。鑒于多特異性抗體分子中不同功能域的非天然排列，與靶蛋白可能形成大型復合物，導致免疫原性風險增加。如ABT-122和JNJ-61178104是在阿達木單抗（TNF-α，三聚體）骨架上添加IL-17A結合域（IL-17A，二聚體）的雙抗。在健康志愿者研究中，發現ABT-122和JNJ-61178104 的ADA發生率分別為99%和99.99%。

免疫調節  

多特異性療法關于免疫調節數據在不斷增加，免疫原性風險因素逐漸成為關鍵因素。如藥物分子是否涉及多個免疫檢查點的拮抗作用？是否結合B細胞？是否涉及免疫檢查點激動作用？nivolumab單一治療時ADA體發生率為11.2%，nivolumab與ipilimumab聯合治療時ADA躍升至37.8%。CD3是橋聯細胞的常用靶點，而CD3的結合似乎容易產生ADA反應，如otelixizumab或teplizumab。此外，靶蛋白為多聚體膜蛋白的抗體分子，可介導細胞表面的復合物形成。當這些靶點在抗原呈遞細胞中表達時，可以促進復雜的攝取并增加T細胞介導的適應性免疫應答。

02多特異性抗體生物分析策略

多特異性抗體藥物較傳統單抗藥物更為復雜，整合PK、ADA和PD數據有助于了解免疫原性的臨床影響。運用科學和戰略性的判斷非常重要，需要充分考慮測定形式、樣品收集的預分析以及靶標和治療方法的潛在生物學。

藥代動力學PK

 一般多特異性抗體藥物PK方面的要求與單抗藥物相同，但需要對其固有特性予以特殊考慮。如用競爭的抗獨-特型抗體或靶點蛋白只能檢測同時具有未占據的抗TNF-α和未占據的抗IL-17A的完-全游離抗體分子。還需要額外檢測游離adalimumab或游離IL-17A結合域，可以用兩種靶點的競爭型抗獨-特型抗體與非競爭型抗獨-特型抗體配對，分別檢測兩種游離形式的分子。

抗藥抗體ADA

與PK生物分析策略考慮類似，多特異性抗體免疫原性測定的選擇和開發，也應在藥物開發階段進行適當的科學和戰略性思考。橋接法測定ADA可以檢測不同結合親和力水平和不同亞型的ADA，但這需要所檢測的樣本具有高Ctrough。另外，方法學開發要充分掌握靶點特點和藥物結構。通常基于細胞的抗藥物中和抗體 (nAb)評估被認為是金標準。如HC-12的整個臨床開發過程中評估nAb很重要，但我們建議不要開發專門的中和抗體檢測方法。相反，一種利用游離PK、PD和ADA等測定數據整合方法，比使用獨立的nAb測定更具信息價值。FDA指南指出，以數據整合方法判斷ADA中和活性具有潛力。

藥效PD

就HC-12而言，基于治療藥物的作用機制，適當PD評估可能包括循環系統中游離TNF-α和IL-17A細胞因子以及自身免疫性疾病標志物的定量檢測。雖然更具挑戰性和復雜性，但其PD評估可能包括TNF-α、IL-17A通路特異性細胞應答。基于假設，這種PD生物標志物應該可以很好地跟蹤藥物濃度水平，并且以足夠靈敏檢測nAb反應。

以上研究案例說明充分了解藥物和靶標的潛在四級結構對于多特異性抗體藥物研究尤為重要。這些結構可能形成大型免疫復合物來增加免疫原性發生率。對于多特異性療法，在風險評估中考慮藥理學對免疫原性的潛在影響至關重要。

?抗獨-特型抗體技術服務

義翹神州有多種方案可以解決抗獨-特型抗體開發中遇到的難點問題，可以提供從抗原制備、抗獨-特型抗體開發到檢測方法建立、試劑盒開發的全-套-服務。

抗獨-特型抗體制備服務

豐富的抗原酶切經驗：全長抗體、雙特異抗體、Fc融合蛋白等多類型抗原酶切及純化經驗

免疫原類別多樣性：全長抗體、F(ab')2 、Fab、ADC偶聯抗體藥、雙抗等

多種屬選擇：鼠、兔多種純化方式：Protein A、抗原親和、總人IgG、同型IgG

多種免疫方案，提高效價及篩選成功率

純化抗體高效價、高特異性、人IgG低交叉

99.99%成功率，客戶遍布中外

血藥濃度檢測服務

單抗藥物和蛋白類藥物血藥濃度測定方法建立、驗證及相應試劑盒開發生產。

免疫原性研究服務

分析方法設計、建立、驗證及試劑盒生產。

成功完成人內皮抑素和G-CSF等一系列免疫原性研究服務，交付客戶成品試劑盒。