作為癌癥中最常見的基因改變，超過一半的人類癌癥都有p53突變，從而導致轉錄失活。然而，p53如何調節"immune landscape"，為免疫逃逸創造有力條件仍然難以捉摸。該項研究中發現，癌癥干細胞(CSCs)建立了一個白細胞介素-34(IL-34)協調的生態位，以促進p53缺失的肝癌的腫瘤發生發展。在機制上發現IL-34是一個被p53轉錄抑制的基因，而p53缺失導致CSCs分泌IL-34。IL-34誘導cd36介導的脂肪酸氧化代謝升高，從而驅動泡沫樣腫瘤相關巨噬細胞(TAMs)的M2樣極化。這些IL-34協調的TAMs抑制CD8+T細胞介導的抗腫瘤免疫，以促進免疫逃逸。阻斷IL-34-CD36軸可引起抗腫瘤免疫，并與抗pd-1免疫治療協同作用，導致完quan應答。該研究結果揭示了p53調節腫瘤免疫微環境的潛在機制，并為p53失活的癌癥免疫治療提供了一個潛在的靶點。

文章：Interleukin-34-orchestrated tumor-associated macrophage reprogramming is required for tumor immune escape driven by p53 inactivation IF=25.5

對Trp53WT和Trp53缺失的腫瘤進行了rna測序，結合q-PCR、ELISA和免疫印跡結果，發現CSCs在Trp53缺失的腫瘤樣本表達的IL-34顯著升高，多重免疫組化染色顯示IL-34和EpCAM共定位于Trp53缺失的腫瘤，EpCAM+ CD47+ CSCs在Trp53缺失的腫瘤中不表達p21。這些結果共同表明，p53失活的CSCs是分泌IL-34的主要細胞亞群。

圖1 由p53失活的CSC異常高分泌的IL-34促進了肝癌的腫瘤發生

為了驗證p53可能抑制IL34轉錄的猜測，使用abs50034染色質免疫共沉淀(ChIP)試劑盒采用ChIP-seq(K)+ChIP-qPCR(L)+DNA pull down(M)聯合證實p53可直接抑制IL34的轉錄！

圖2 ChIP-seq(K)+ChIP-qPCR(L)+DNA pull down(M)

(K)染色體視圖圖顯示了p53在IL34和CDKN1A的啟動子上的結合（p21；陽性對照）。

(L)用對照抗體IgG或抗p53或抗rna聚合酶II對HepG2細胞進行染色質免疫共沉淀，然后用IL34啟動子引物進行PCR。

(M)免疫印跡分析生物素化和未生物素化的IL34啟動子探針的下拉沉淀（與HepG2細胞提取物）

考慮到IL-34是參與單核細胞增殖、存活和向巨噬細胞分化的細胞因子，研究者用CIBERSORT研究了肝臟腫瘤免疫細4胞的組成，發現IL-34的表達與巨噬細胞的比例呈正相關。空間轉錄組測序和多重免疫組化結果表明Trp53null腫瘤中的大多數tam是單核細胞來源的巨噬細胞(MDMs)，進一步的研究發現，在trp53缺失的腫瘤中，tam在分泌il-34的CSCs附近積累，基因集富集分析表明，來自Trp53null腫瘤的tam在脂滴特征上富集，BODIPY脂肪酸探針對tam進行染色表明，trp53缺失腫瘤中的tam類似于泡沫樣巨噬細胞，差異基因分析顯示，Trp53null腫瘤中CD206+和CD163+巨噬細胞的比例增加，這些結果共同表明，積聚在csc附近的tam表現出脂質負載的促腫瘤表型。Trp53^+/+ 或Trp53^-/-與骨髓源性巨噬細胞共培養后檢測發現，IL-34在Trp53null腫瘤中促進脂質積累和tam的促腫瘤極化。

圖3 IL-34在p53失活的CSCs附近誘導泡沫樣tam

在接下來的實驗中，研究者證明了IL-34通過CD36促進脂肪酸攝取，并通過FAO代謝重編程誘導巨噬細胞的促腫瘤極化，為了提供IL-34-CD36軸在體內促進TAM脂質積累和m2樣巨噬細胞極化的直接證據，研究者將Il34過表達的CT細胞(Trp53+/+)和Il34基因敲除的PT細胞接種到小鼠體內，發現Il34過表達的腫瘤中tam的比例高于CT腫瘤，通過注射氯膦酸脂體對巨噬細胞進行全身耗竭，il-34缺陷PT腫瘤與對照PT腫瘤之間的腫瘤生長差異被消除，流式細胞術和共培養實驗表明，IL-34-CD36軸協調的TAM通過抑制Trp53null肝癌中的T細胞介導的抗腫瘤免疫來促進腫瘤免疫逃逸。

在隨后的小鼠實驗中發現，用抗IL-34或CD36的中和抗體治療Trp53/PT腫瘤小鼠，IL-34或CD36的抗體阻斷導致腫瘤生長明顯受限，對TP53突變的肝癌的公共單細胞RNA-seq數據的分析表明，腫瘤細胞高表達IL34，TAM表現出強勁的CD36表達，而其在所有其他細胞類型中的表達都很弱。總之，結果表明，阻斷IL-34信號傳導可能成為TP53突變癌癥患者的潛在免疫療法。

圖4 阻斷IL-34信號可抑制肝癌生長并導致p53失活

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