一、傳代培養

傳代培養是指需要將培養物分割成小的部分，重新接種到另外的培養器皿（瓶）內，再進行培養的過程。對單層培養而言，80%匯合或剛匯合的細胞是較理想的傳代階段。傳代培養中的細胞傳代培養（subculture），當原代培養成功以后，隨著培養時間的延長和細胞不斷分裂，一則細胞之間相互接觸而發生接觸性抑制，生長速度減慢甚至停止；另一方面也會因營養物不足和代謝物積累而不利于生長或發生中毒。

二、RAW264.7細胞傳代步驟

在進行RAW264.7細胞傳代時，首先需要將舊培養基棄去，并使用PBS洗滌細胞1-2次，確保細胞表面干凈。然后向培養瓶中加入2 mL PBS，使其浸潤所有細胞，輕輕吹打細胞以將其吹下，將細胞懸液收集至無菌離心管中。使用1000 rpm的離心速度離心5分鐘，棄去上清液，再加入1-2 mL培養基并充分重懸細胞。

接下來，將懸液按1:2的比例進行傳代至新的培養皿或培養瓶中，并將其置于培養箱中進行培養。通過這些步驟，可以有效地進行RAW264.7細胞的傳代操作，促進細胞的增殖和持續生長，以維持細胞系的活力和穩定性。傳代是細胞培養中的重要步驟，有助于確保RAW264.7細胞在研究中的連續性和穩定性。

三、RAW264.7細胞凍存具體步驟

1. 首先需要收集細胞并將其轉移至無菌離心管中。使用1000 rpm的離心速度離心5分鐘，將上清液棄去。

2. 隨后，向細胞中添加1 ml細胞凍存液（包含20% FBS的培養基和10% DMSO），輕輕吹打混勻，將1 ml細胞懸液吸取至凍存管中，并做好詳細的標記。

3. 將凍存管置于梯度降溫凍存盒中，并將其放入-80℃冰箱中過夜，確保冷凍過程緩慢進行。

4. 隨后，將已凍存的細胞轉移至液氮罐中進行長期儲存，以確保細胞的保存和使用。通過這些步驟，可以有效地進行RAW264.7巨噬細胞的凍存，以供日后實驗或應急需求使用。

四、推薦使用產品

凍存液推薦：WAKO無血清凍存液

實驗中會用到的PBS推薦：