摘要本研究展示了一種比較品牌和仿制非處方 (OTC) 對乙酰氨基酚藥物中相關雜質的方法。該工作流程包括 Agilent InfinityLab 液相色譜/質譜選擇性檢測器 (LC/MSD iQ) 和Agilent 1290 Infinity II 液相色譜系統。本研究鑒定的雜質濃度低于使用 UV 能夠可靠檢出的濃度。

前言多數 OTC 藥物都是根據品牌產品開發的仿制藥，無需處方即可購買。這些仿制藥由不同的制造商出售，有助于刺激競爭并降低價格，使患者更容易負擔。仿制OTC 藥品生產企業必須滿足與 USFDA 針對已批準品牌藥確定的規格、純度、穩定性和相關雜質限度等相同的質量屬性[1]。仿制藥品制造商必須能夠表征其產品及其雜質，通常使用 HPLC 和 UV 檢測。添加質量選擇檢測器可以大大縮短典型 USP或 EP 方法的分析時間[2]，因為共洗脫組分可以由目標化合物的質量明確地確定。本研究對比了對乙酰氨基酚品牌藥和仿制OTC 藥中的相關雜質。使用 InfinityLabLC/MSD iQ 和 1290 Infinity II 液相色譜系統篩查雜質。基于單四極桿技術的LC/MSD iQ 是一款強大耐用的檢測系統，其設計重點是簡單易用性和可靠性。這是一款直觀的儀器，只需極少的用戶培訓。它可以采用高液相色譜流速，并能自動優化 MS 參數，以提供最佳結果。使用質譜檢測能夠確保對活性藥物成分(API) 及其相關雜質，以及更為重要的任何未知或意外雜質進行明確檢測。色譜工作人員可以輕松地將 LC/MSD iQ 作為新模塊加入現有液相色譜堆棧中。此款儀器經過專門設計，可以輕松集成到Agilent 1260 Infinity II 液相色譜系統、1290 Infinity II 液相色譜系統甚至更舊型號的液相色譜系統中，其空間設計可插入與液相色譜模塊相同的電源插座中。包括 MS 和真空泵在內的 HPLC 堆棧可置于Agilent InfinityLab Flex Bench MS 移動支架上，從而節省了工作臺空間，并可快速安全地移動整個系統。

實驗部分標準品與化學品所有試劑和溶劑均為 HPLC 或 LC/MS級。甲醇購自 Honeywell (Morristown,NJ, USA)。對乙酰氨基酚 API 其相關雜質和乙酸的標準品購自 Millipore-Sigma(Merck, Darmstadt, Germany)。超純水產自采用 LC-Pak Polisher 和 0.22 µm 膜式終端過濾器濾芯的 Milli-Q Integral 系統(EMD Millipore, Billerica, MA, USA)。OTC 藥品樣品購自當地藥店，品牌產品為藥品 1，仿制產品為藥品 2。

儀器LC/MSD iQ 系統包括以下模塊：• Agilent 1290 Infinity II 高速泵(G7120A)• Agilent 1290 Infinity II 樣品瓶進樣器(G7129B)• Agilent 1290 Infinity II 高容量柱溫箱(G7116B)• Agilent 1290 Infinity II 二極管陣列檢測器 (G7117B)• Agilent LC/MSD iQ (G6160AA)將 DAD 與 60 mm 安捷倫最大光強卡套式流通池 (G4212-60007) 配套使用，以使LC/MSD iQ 的 UV 檢測獲得最大靈敏度。 

樣品前處理將選定藥物雜質標準品稱量至 15 mLFalcon 管中，用甲醇稀釋至 1 mg/mL 的工作濃度，然后超聲處理約 15 分鐘。將100 µL 每種標準品加入 2 mL 螺口樣品瓶中，并用 80:20 甲醇/水稀釋至 1 mL。用 80:20 甲醇/水進行連續稀釋，以制備以下外部校準曲線的濃度：10、5、2.5、1、0.5 和 0.1 µg/mL。OTC 藥物樣品為片劑，每片對乙酰氨基酚 (API) 劑量為 500 mg。使用甲醇對 API 及其雜質進行簡單的液相萃取。將藥物片劑置于包含 10 mL 甲醇的 15 mL Falcon 管中，振蕩 30 分鐘，超聲處理約 30 分鐘，然后以 4500 rpm 的轉速在離心機中離心約 15 分鐘。然后，從 Falcon 管中吸取1 mL 最終溶液到 2 mL 螺口樣品瓶中進行分析，最終 API 濃度為 50 mg/mL。

Agilent OpenLab CDS使用 Agilent OpenLab CDS 軟件進行數據采集、處理和報告。OpenLab CDS 提供法規認證功能，可根據美國 FDA 21 CFRPart 11、歐盟附錄 11 及其他類似法規提供數據可靠性支持。1290 Infinity II LC 和LC/MSD iQ 旨在確保 GxP 實驗室常規應用中可靠且穩定的 LC/MS 分析。

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結論Agilent LC/MSD iQ 可以輕松檢出 OTC 藥品中存在的低至皮克級柱上量 (ng/mL)的雜質。分析品牌和仿制 OTC 藥中的雜質，并進行對比。該品牌藥含有四種可檢出雜質：4-氨基苯酚、RC-A、RC-B 和 RC-D，而仿制藥含三種可檢出雜質：4-氨基苯酚、RC-A 和 RC-B。即使對品牌藥的分析顯示存在更多檢出雜質，但仿制藥中這些雜質的濃度更高。兩種 OTC 產品均按照 USFDA 指南[3] 生產，且雜質濃度遠低于指南中規定的濃度：15 µg/mL 或 0.03% API。在這些濃度下（參見表 4），UV 檢測器無法可靠地定量這些雜質。此外，在兩種 API 之間觀察到的雜質譜差異可以歸因于原材料來源以及制造過程中使用的合成和純化工藝差異。