創新性樣品制備方法，有效消除三甲胺易揮發性對實驗結果準確度的影響。

頂空進樣結合GC-MS/MS測定，有效抑制了基質化學干擾，保證結果可靠性。

堿改性SH-Volatil Amin有效提升了對三甲胺的惰性，改善峰形及分析穩定性。

1.1 儀器

GCMS-TQ8050NX三重四極桿氣相色譜-質譜聯用儀

AOC-6000自動進樣器

1.2 分析條件

頂空參數：

恒溫爐溫度：80 ℃

頂空針溫度：100 ℃

平衡時間：30 min

GC-MS/MS參數：

色譜柱：SH-Volatil Amin, 30 m x 0.32 mm x 5.0 μm, P/N：R227-36326-01

柱溫程序：40 ℃(0.5min)_20 ℃/min_200℃(5 min)

進樣量：1 mL

進樣方式：分流進樣

分流比：10：1  

進樣口溫度：200 ℃

載氣控制方式：恒流模式

柱流量：2 mL/min

離子化方式：EI

離子源溫度: 200 ℃

色譜質譜接口溫度 : 230 ℃

檢測器電壓：調諧電壓+0.5kV

采集模式：MRM，離子對信息見表1

樣品前處理

3.1 三甲胺標準溶液譜圖

3.2 標準曲線和質量色譜圖

使用5%三氯乙酸溶液配制三甲胺鹽酸鹽標準溶液系列, 濃度分別為0.1、0.5、1.0、2.0、5.0和10.0μg/mL(以三甲胺計)，精密量取各濃度標準溶液2mL分別置于預制好的頂空瓶石蠟層上部，壓蓋密封后，進 GC-MS/MS分析。以三甲胺濃度為橫坐標，三甲胺定量離子對峰面積為縱坐標作標準曲線，標準曲線如圖2 所示，線性相關系數如表2所示，三甲胺質量色譜圖見圖3。

3.3 重復性實驗及檢出限

取三甲胺鹽酸鹽標準溶液(以三甲胺計，0.1μg/mL) 2mL置于預制好的頂空瓶石蠟層上部，平行制備樣品6份并連續進樣，用于考察三甲胺峰面積的重復性，測定結果見表3。以3倍信噪比(峰至峰)計算檢出限，三甲胺儀器檢出限見表2。

3.4 加標回收率

三甲胺是動物類中藥中內源性化合物，同時由于三甲胺的易揮發性，在本實驗中，選擇三甲胺鹽酸鹽標準溶液進行加標回收實驗。美洲大鐮中加標濃度分別為50和500mg/kg，按照前ER每個加標濃度平行制備3份加標樣品，考察回收率和RSD。50mg/kg加標水平下，加標回收率分布在88.08%-103.63% 之間，RSD為 9.10%；500 mg/kg加標水平下，加標回收率分布在93.39%-97.08%之間，RSD為2.06%；詳細結果見表4。

3.5 實際樣品分析結果

選取產地不同的地龍、美洲大鐮和水蛭為樣品，按前述樣品處理流程進行樣品制備，并采用上述儀器條件測定，三甲胺檢測結果如表5所示。

含-NH-的化合物容易和色譜柱熔融石英表面-Si-OH形成分子間氫鍵，容易導致色譜峰拖尾和柱上吸附，影響胺類分析結果準確性和重現性。

方法選擇：對于甲胺、二甲胺、三甲胺檢測一方面可以考慮離子色譜，另一方面可以考慮氣相色譜，分析揮發胺相對更簡單快速。

GC柱選擇：如使用常規色譜柱，建議增大膜厚以改善對胺類惰性，但吸附問題無法徹底消除，因此更建議堿改性揮發胺專用柱，一方面通過堿改性真實提升對胺類惰性，另一方面高膜厚增加了對揮發胺保留，從而有效分離揮發胺。