伴隨生物醫藥行業的飛速進步，愈發增多的生物制品正逐步在維護人類健康和治療疾病方面得以應用，諸如治療性抗體藥物、細胞治療，基因治療，病毒載體疫苗等。相較于傳統的口服類藥物，生物制品往往是以注射等形式直接進入到人體。故而，對其安全性提出了更為嚴苛的要求。其中，宿主核酸 (HCD) 殘留這一具有潛在傳染性與致瘤性風險的因素，變成了生物制品安全監管中極為關鍵的一環。世界衛生組織 (WHO)、國家藥品監督管理局藥品評審中心 (CDE) 以及各國政府均針對生物制品中宿主核酸殘留制定了嚴格的標準和規定。因此，生物制品工藝開發過程中，怎樣運用更低的成本來實現更為高效的 HCD 去除，已然成為了研究的熱點所在。

利用核酸酶進行HCD去除的優勢

核酸酶，又稱非限制性核酸內切酶，是一種來源于粘質沙雷氏菌 (Serratia Marcescen) 的非特異性核酸內切酶，可以降解各種形式的 (雙鏈，單鏈，線狀，環狀，天然或變性) DNA和RNA，已廣泛應用于上市藥品生產過程中的宿主核酸控制，與其他HCD去除方法相比，利用核酸酶去除HCD具有以下優勢：

l 特異性高：核酸酶可以特異性地識別和降解HCD，而不會對目標產物造成影響。

l 處理條件溫和：核酸酶的反應條件相對溫和，不需要高溫、高壓或強酸強堿等條件，有利于保持目標產物的活性和結構完整性。

l 去除效率高：核酸酶可以將HCD降解成較小的片段，從而更容易被去除。

l 適用性廣：核酸酶可以用于不同類型的生物制品和樣品，包括細胞培養液、血清、血漿等。

l 可重復性好：核酸酶的去除效果相對穩定，可重復性好，有利于確保產品的質量和安全性。

利用核酸酶進行HCD去除的挑戰

在生理鹽條件下的體外水解實驗中，核酸酶可以迅速降解宿主DNA，但在復雜的工藝條件下使用仍面臨著眾多挑戰。

l 宿主DNA通常以染色質形式存在，易被蛋白質包裹，導致DNA難以暴露。但在高鹽環境下，核酸與蛋白質可有效分離，從而使核酸去除更加簡便。

l 對于AAV等病毒載體，會因為靜電相互作用而發生聚集，這種聚集會降低病毒穩定性，從而影響得率，因此提高鹽濃度，可以有效減少AAV病毒顆粒的聚集，從而提高其得率。

l 在純化的工藝過程中，有些需要利用高鹽洗脫的層析樣品，其宿主細胞核酸含量偏高，則需要采取相應措施降低宿主核酸含量。

除此之外，傳統全能核酸酶的活性會隨著鹽濃度升高而急劇下降，在中、高鹽條件使用這類核酸酶會造成生產成本顯著增加。

為了解決傳統核酸酶的使用痛點，逐典生物依托經驗豐富的Ai重組酶定向改造平臺，成功自主研發了Pannarase耐高鹽全能核酸酶和更高鹽耐受型的Pannarase耐高鹽全能核酸酶（SAN）。相比傳統核酸酶，耐高鹽核酸酶的酶活性高，終產物回收率高，能夠特異性適配不同應用場景，在病毒純化、疫苗生產、蛋白和多糖類制藥工業作為HCD去除試劑，可有效去除宿主殘留核酸，保證生物制品功效及安全性。使高鹽環境下的高效HCD去除成為了可能。

逐典生物耐高鹽全能核酸酶產品特點

2 高酶活性：中、高鹽緩沖液條件下，酶活性高

2 高回收率：高鹽環境下減少核酸纏繞病毒或目的蛋白，降低AAV等病毒顆粒聚集，提高目的產物回收率

2 高工藝簡便性：下游收獲或純化無需超濾換液或透析脫鹽

逐典生物耐高鹽全能核酸酶性能驗證數據

? Pannarase耐高鹽全能核酸酶

在150 mM Na+濃度條件下酶活性最高，300 mM時仍有36.2%的活性

圖1. Pannarase耐高鹽全能核酸酶耐鹽曲線

圖2. Pannarase耐高鹽全能核酸酶酶切數據

? Pannarase耐高鹽全能核酸酶（SAN），更高鹽耐受型

在600~700 mM Na+濃度條件下酶活性最高

圖3. Pannarase耐高鹽全能核酸酶 (SAN), 更高鹽耐受型耐鹽曲線

圖4. Pannarase耐高鹽全能核酸酶 (SAN), 更高鹽耐受型酶切數據

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