在AAV（腺相關(guān)病毒）的純化過(guò)程中，為了病毒的回收率，研究者們常常會(huì)遇到一系列挑戰(zhàn)。本文將探討這些挑戰(zhàn)，并給出相應(yīng)的應(yīng)對(duì)策略，幫助大家更好地應(yīng)對(duì)AAV純化的難題。

一、高鹽濃度環(huán)境下的挑戰(zhàn)

挑戰(zhàn)：為了增強(qiáng)病毒的穩(wěn)定性，我們通常會(huì)使用較高鹽濃度的buffer（200-500 mM）。然而，傳統(tǒng)的全能核酸酶在高鹽條件下活性會(huì)大幅下降，這使得去除核酸污染變得更為困難。

應(yīng)對(duì)：采用耐高鹽的全能核酸酶，這類(lèi)酶在高鹽環(huán)境中依然能保持高活性，是去除核酸污染的理想選擇。通過(guò)使用這類(lèi)酶，我們可以更高效地去除殘留的核酸，提高病毒純度。

二、宿主DNA去除的挑戰(zhàn)

挑戰(zhàn)：宿主DNA通常以染色質(zhì)形式存在，容易被蛋白包裹，導(dǎo)致DNA無(wú)法暴露，增加了去除的難度。

應(yīng)對(duì)：在高鹽環(huán)境下，核酸和蛋白質(zhì)能有效分離。因此，我們可以在高鹽條件下進(jìn)行純化操作，使宿主DNA與蛋白質(zhì)分離，從而更容易去除殘留的DNA。

三、病毒顆粒聚集的挑戰(zhàn)

挑戰(zhàn)：AAV等病毒載體會(huì)因靜電相互作用而發(fā)生聚集，尤其在低離子強(qiáng)度和殘留DNA的情況下更易聚集，這會(huì)導(dǎo)致病毒穩(wěn)定性降低和得率減少。

應(yīng)對(duì)：通過(guò)提高鹽濃度，我們可以有效減少AAV病毒顆粒的聚集。這是因?yàn)楦啕}環(huán)境能夠中和病毒顆粒之間的靜電相互作用，從而防止聚集。同時(shí)，確保在純化過(guò)程中去除殘留DNA，也是減少病毒顆粒聚集的關(guān)鍵。

四、純化技術(shù)選擇的挑戰(zhàn)

挑戰(zhàn)：在AAV純化過(guò)程中，選擇合適的純化技術(shù)對(duì)于提高病毒回收率和純度至關(guān)重要。然而，不同的純化技術(shù)各有優(yōu)缺點(diǎn)，選擇起來(lái)十分困難。

應(yīng)對(duì)：我們可以采用如陰離子交換層析等先進(jìn)技術(shù)。這種技術(shù)利用完整衣殼與空衣殼之間的微小差異，通過(guò)離子交換層析實(shí)現(xiàn)高效純化。同時(shí)，陰離子交換層析能夠在保持較高病毒回收率的同時(shí)，提高病毒的純度。

AAV病毒純化過(guò)程中面臨的挑戰(zhàn)多種多樣，但只要我們掌握正確的應(yīng)對(duì)策略，就能輕松應(yīng)對(duì)這些挑戰(zhàn)。通過(guò)采用耐高鹽的全能核酸酶、在高鹽環(huán)境下進(jìn)行純化操作、提高鹽濃度防止病毒顆粒聚集以及選擇合適的純化技術(shù)等方法，我們可以病毒的回收率，同時(shí)保證病毒的純度。

為更好滿足AAV病毒純化過(guò)程中高鹽環(huán)境對(duì)全能核酸酶的活性要求， 逐典生物自主開(kāi)發(fā)出超耐高鹽版本全能核酸酶，在高鹽條件下，仍具有高酶活，是AAV病毒生產(chǎn)及其它生物工藝流程中去除核酸污染的理想選擇。

五，逐典超耐高鹽全能核酸酶優(yōu)勢(shì)

1.更高鹽耐受度

當(dāng)鹽離子濃度在600~700mM時(shí)，初代全能核酸酶幾近失活，而SAN仍能保持較高活性。

圖1.不同鹽濃度下耐高鹽全能核酸酶(SAN)與初代全能核酸酶活性對(duì)比

2.高效核酸降解力

同對(duì)照組相比，添加SAN后能夠有效去除核酸殘留。

圖2 加入SAN 前后的消化效果圖

六，逐典耐高鹽核酸酶應(yīng)用案例：