細胞計數儀對于做動物細胞培養的老師而言，可以算是簡單又常用的分析儀器之一了。但看似簡單的細胞計數儀，也可能讓使用者為之抓狂。

曾收到一位做工藝開發的老師反饋，他使用的一款細胞計數儀三次檢測同一個樣品，每次分析結果和平均值的偏差都超出正常可接受范圍。
這么簡單的儀器為何會出現這種問題

是否是儀器本身的性能問題

如果您手頭已有細胞計數儀在使用，如何來判定這款細胞計數儀的重復性和準確性呢？

根據《定量細胞計數方法性能的實驗設計和統計分析（ISO20391-2:2019）》一文中，關于細胞計數方法性能判定的實驗設計，建議至少做4個濃度梯度，每個濃度梯度至少做3次重復性測試。我們可以考慮使用該方法來評判手上細胞計數儀的性能好壞，具體的細胞選擇和樣品制備上可以參考ISO20391-2:2019里面的具體描述。

在此，我們拿Vi-CELL BLU全自動細胞計數儀和另一款半自動插板式細胞計數儀分別進行細胞計數的重復性和準確性的性能評估。

這里檢測用到的是一種腫瘤細胞，按4個濃度梯度稀釋（原液，2倍，5倍和10倍稀釋），并且每個濃度做3組重復性檢測，以下是測試得到的結果和統計數據。

針對同一個樣品的4個不同稀釋倍數和3組重復性檢測，同時使用半自動細胞計數儀（通常需要使用細胞計數板作為載體，同時臺盼藍染色需要手動完成）檢測是怎樣的效果呢？如下表所示是一款半自動細胞計數儀上檢測得到的數據。

由于半自動細胞計數儀裝機后很久未做過標樣的驗證和校準，所以和全自動細胞計數儀的測試結果之間的差異在此不做比較分析。

為了能比較得出這兩臺細胞計數儀的重復性和準確性的性能水平，我們將每臺儀器3次原液檢測（編號：S3-原液）得到的活細胞密度平均值作為“真值”。那么Vi-CELL BLU得到的“真值”是3.44M，而半自動細胞計數儀得到的“真值”是3.06M。而其他3個稀釋倍數下計算得到的平均結果，都分別和這個“真值”進行比較，并且計算得到相對偏差。

通過分析我們可以看到隨著S3樣品的稀釋倍數不斷增加，Vi-CELL BLU的活細胞密度平均值偏差也逐漸變大，但都在±10%的偏差范圍內。同時每個稀釋倍數下的3次重復性檢測RSD都小于5%，顯示出良好的測試結果重復性。

而半自動細胞計數儀對5倍和10倍稀釋的樣品檢測，3次測試結果的相對標準偏差已經大于10%，并且稀釋10倍的活細胞密度平均值和原液“真值”結果比較，偏差達到了15.03%。所以，半自動細胞計數儀的重復性檢測上相對要差很多，并且隨著稀釋倍數增加，檢測得到的結果和原液結果之間的偏差加大。

通過以上這種性能檢測方法，我們可以得出無論是在3次測試的重復性，還是梯度稀釋結果的準確性，Vi-CELL BLU全自動細胞計數儀都比半自動細胞計數儀更有優勢。如果您對自己使用的細胞計數儀性能感興趣，也可以嘗試用這個方法來檢測判斷。

至于為何Vi-CELL BLU全自動細胞計數儀在重復性檢測和梯度稀釋的測試準確性上，都比半自動插片式細胞計數儀更有優勢？下一期的內容，我們將針對這個問題為您做具體的介紹。