大家好！這篇文章是關于原代培養的入門知識，向剛入門的同學科普這個實驗的基礎。

包括以下內容：

1. 原代培養的概念和流程

2. 分離組織的操作和注意事項

3. 解離組織獲取細胞的三種常見方法

原代培養是指細胞分離之后至第一次傳代之前的細胞培養階段，之后細胞就轉變成細胞系。

原代培養可分為4個步驟：

1. 獲取樣品
   

2. 分離組織

3. 解剖或解離組織

4. 接種于培養皿中培養

用于原代培養的樣品中可來源于2類，一是實驗室樣本，包括實驗動物的器官、組織，例如胚胎、腸道等；二是臨床樣本，例如通過手術過程分離出來的病人組織。

分離組織

1. 在取材時可以盡量多去除脂肪和壞死的組織。
2. 使用鋒利的手術刀將組織切碎，以減小對組織的損傷

獲取細胞

獲取組織之后，我們要把細胞從組織中分離出來繼續生長，這個操作可分為兩種:

1.將組織塊貼附于適宜的基質中，細胞可從組織塊向外遷移生長，這個操作過程叫原代外植;

2.將組織塊用機械法或酶消化法處理獲得細胞懸液，接種細胞懸液，其中部分細胞最終將黏附于基質開始生長。

如果所取組織很小，則適于用原代外植法；如果組織較大，可用酶消化法以獲得更多的細胞。

軟的組織適合于用機械法解離，一些硬的組織，如果產物的多少并不重要，或者從纖維間質組

織分離松散黏附的細胞，也可用機械法分離。

胰蛋白酶處理

酶處理方法主要分為胰蛋白酶和膠原酶處理，而胰蛋白酶的反應條件來劃分又可以分為冷胰蛋白酶和溫胰蛋白酶兩種。

• 切碎或“溢出”，切割作用或被切表面的破損使細胞釋放出來
• 篩網擠壓，用注射器芯將組織擠壓過篩網
• 注射器吸打，將組織吸入注射器中，通過-個大孔徑的針頭或導管將液體快速打出
• 用吸管打碎，用大孔徑的吸管吸取組織塊上下吹打

2 不同種類的細胞應采用相應的解離方法，例如，胰蛋白酶比膠原酶作用強，建立單細胞懸液更高效；膠原酶不能解離上皮細胞，但這一特性成為它的一個優點，可利用它使上皮細胞與間質細胞分離并保持上皮細胞團的活力。機械法比酶消化法快，但對細胞損傷大。

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