質(zhì)譜分析/脂質(zhì)組學(xué)分析/靶標(biāo)（非靶標(biāo)）代謝組分析

質(zhì)譜分析

中國生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)聯(lián)盟引進(jìn)美國安捷倫公司的液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀。形成了高通量、高靈敏度和高分辨率的規(guī)模化蛋白質(zhì)分析支撐技術(shù)體系，為促進(jìn)蛋白質(zhì)組學(xué)及相關(guān)研究的發(fā)展，共享先進(jìn)的技術(shù)資源，近年來生物質(zhì)譜實(shí)驗(yàn)室蛋白質(zhì)/多肽質(zhì)譜鑒定、生物工程藥物結(jié)構(gòu)確證和蛋白質(zhì)組學(xué)多項(xiàng)成熟的分析技術(shù)已為國內(nèi)外客戶提供了廣泛的服務(wù)。

設(shè)備儀器：

美國安捷倫公司Agilent （xct-6330） 型號(hào)的液相色譜儀，MS為美國熱電公司的TSQ型號(hào)質(zhì)譜儀；質(zhì)譜儀采用ESI（電噴霧電離）離子源，MS/MS 串連四極桿分析器。可在線檢測極性有機(jī)化合物、核酸、多肽、小分子蛋白質(zhì)及其化學(xué)修飾產(chǎn)品的實(shí)際分子量，并對(duì)送檢樣品進(jìn)行分子量鑒定，純度及修飾效果分析。

質(zhì)量范圍M/Z 10～2,000? 分辨率R=2M

測試范圍：?

多肽、蛋白質(zhì)的電噴霧質(zhì)譜分子量測定以及天然產(chǎn)物分子、生物大分子、有機(jī)分子的質(zhì)譜測試和研究

送檢樣品要求：樣品應(yīng)盡量不含鹽份、離子表面活性劑、去垢劑及一些難揮發(fā)性鹽。樣品送檢量、溶解方式以及未知可否做質(zhì)譜檢測的樣品可與我們的工作人員聯(lián)系以便提高檢測效率。

（送樣單請附帶檢測樣品的品名及精確計(jì)算分子量）

送樣須知：

A：樣品量：50pmol干粉或1ug/uL以上（一般測試）、100pmol干粉或1ug/uL以上（MALDI串聯(lián)質(zhì)譜分析）、100ug干粉以上（二硫鍵分析、糖基化分析，磷酸化分析，其他修飾分析）、10ug干粉以上（SDS-PAGE或IEF）；

B：鹽含量：揮發(fā)性無機(jī)鹽，<20mM，請勿使用PBS、SDS和尿素等質(zhì)譜干擾物質(zhì)；

C：考馬斯亮藍(lán)染色樣品可全部接收，銀染過程中不得使用戊二醛作為固定劑；

D：請告知樣品是否有修飾，并請注明修飾方式。

主要應(yīng)用 :?

*?蛋白質(zhì)組學(xué)研究 *?寡聚糖和糖蛋白的研究 *?小分子化合物分析

*?藥物發(fā)現(xiàn)和研發(fā) *?食品和環(huán)境樣品分析

檢測報(bào)告：

從收到樣品起1-2個(gè)工作日內(nèi)可給出樣品的檢測報(bào)告，以電子郵件的形式發(fā)給您并附帶檢測結(jié)果分析。包括結(jié)果有：銷售質(zhì)譜：質(zhì)譜圖、肽段分子量、數(shù)據(jù)庫檢索結(jié)果；? 二級(jí)質(zhì)譜：質(zhì)譜圖、肽段分子量、數(shù)據(jù)庫檢索結(jié)果、肽段氨基酸序列、修飾位點(diǎn)等。

脂質(zhì)組學(xué)分析

對(duì)脂類的準(zhǔn)確鑒定和絕對(duì)定量在脂質(zhì)代謝的綜合研究中起著重要的作用。基于穩(wěn)定同位素標(biāo)記內(nèi)標(biāo)（SIL-IS）及響應(yīng)因子（RF）建立的脂質(zhì)組全定量庫，可對(duì)Plasmenyl-glycerophosphatidylcholine（pPC）、Lysoglycerophosphatidylcholine（LPC）和Sphinganine（Sph）等多達(dá)34類脂質(zhì)進(jìn)行準(zhǔn)確定性以及絕對(duì)定量。相較于傳統(tǒng)的脂質(zhì)組學(xué)檢測方法需要添加 多種SIL-IS的弊端，我們通過引入RF使得我們的脂質(zhì)組全定量方法，在保持與傳統(tǒng)方法相當(dāng)定量精度以及日間重復(fù)性的基礎(chǔ)上，可定性定量物質(zhì)種類更多、通量更高。通過對(duì)我們包含76361種脂質(zhì)、181300張MS/MS二級(jí)質(zhì)譜圖的自建脂質(zhì)二級(jí)質(zhì)譜庫的檢索匹配，我們可以僅用單個(gè)SIL-IS，對(duì)生物樣本種數(shù)萬種脂質(zhì)同時(shí)進(jìn)行準(zhǔn)確定性以及絕對(duì)定量，且上述工作均基于計(jì)算機(jī)程序自動(dòng)化運(yùn)作，高效便捷。

技術(shù)優(yōu)勢

脂質(zhì)檢測效率高：可實(shí)現(xiàn)單一SIL-IS同時(shí)高通量定性，絕對(duì)定量上萬種脂質(zhì)；

專業(yè)團(tuán)隊(duì)檢測分析：通過計(jì)算機(jī)程序自動(dòng)化運(yùn)行。

樣本要求

植物組織? ? ? ? ? ? ? ? ? 200-500 mg

動(dòng)物及臨床組織標(biāo)本? ? ?????200 mg

血清、血漿? ? ? ? ? ? ? ? ?200 μL

微生物、細(xì)胞? ? ? ? ? ? 1×107?cells

生物學(xué)重復(fù)

樣本數(shù)量：植物和微生物n≥6，動(dòng)物樣本n≥10，臨床樣本n≥30，所有重復(fù)樣本獨(dú)立分析。

檢測平臺(tái)

UHPLC-QTOF-MS（Agilent 1290 UHPLC-AB 6600/5600 MS）

UHPLC-QE-MS（Agilent 1290 UHPLC-Thermo Q Exactive Focus/Plus/HF）

檢測范圍

pPC、LPC、Sph、Cer、SM、Cer-p、PhytoSph和HexCer等34類脂質(zhì)

應(yīng)用方向

1、通過分析各種代謝性疾病的不同代謝途徑的脂質(zhì)成分變化，揭示出相關(guān)疾病發(fā)生、發(fā)展過程中脂質(zhì)成分的功能和影響；

2、通過比較不同處理，生物樣本中脂質(zhì)成分的差異，探究脂質(zhì)成分的生物學(xué)功能。?

靶標(biāo)代謝流分析

基于13C或者15N標(biāo)記的靶標(biāo)代謝流分析能夠系統(tǒng)地定量細(xì)胞或者組織內(nèi)特定代謝通路代謝網(wǎng)絡(luò)的流量分布及各代謝途徑的相對(duì)貢獻(xiàn)，其優(yōu)點(diǎn)是可以利用細(xì)胞內(nèi)代謝物的質(zhì)量同位體信息的分析方法，不但在很多情況下能夠直觀地表明代謝流量的整體走向，而且通過計(jì)算能夠準(zhǔn)確定量地揭示細(xì)胞內(nèi)各個(gè)代謝反應(yīng)的活性，以及深入理解平行反應(yīng)、可逆反應(yīng)等多種復(fù)雜的細(xì)胞內(nèi)代謝過程，直觀揭示細(xì)胞胞內(nèi)的主要活性途徑及各個(gè)途徑的相對(duì)貢獻(xiàn)及其分布變化特點(diǎn)，從而鑒定出相關(guān)疾病發(fā)生發(fā)展過程的早期診斷的標(biāo)志物及其關(guān)鍵的主要代謝通路，并揭示其相互調(diào)控規(guī)律，為疾病發(fā)生的臨床早期診斷、藥物靶點(diǎn)治療和預(yù)后判斷提供強(qiáng)有力的科學(xué)依據(jù)。?

檢測范圍

基于13C 標(biāo)記的葡萄糖（Glucose）碳代謝流分析

基于13C標(biāo)記的谷氨酰胺（Glutamine）碳代謝流分析

基于15N標(biāo)記的谷氨酰胺（Glutamine）氮代謝流分析

非靶標(biāo)代謝流分析

經(jīng)典代謝組學(xué)可以反映機(jī)體代謝物的變化及可能被激活的通路，但同一代謝物可能參與多條代謝通路而其豐度不發(fā)生變化。非靶標(biāo)代謝流可以研究代謝流量隨時(shí)間的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律，不限于特定的代謝通路，對(duì)流經(jīng)代謝途徑的代謝流量組進(jìn)行定量分析，能夠很好的解釋代謝物在生物途徑中何如變化，將代謝組學(xué)的研究提升到更高的水平和層次。代謝流分析尤其是基于13C標(biāo)記的代謝流技術(shù)已成為近年來的研究熱點(diǎn)技術(shù)之一。?

技術(shù)優(yōu)勢

分辨率高：可以分辨同位素標(biāo)記和非標(biāo)記代謝物；

與靶標(biāo)代謝流相比，非靶標(biāo)代謝流不限于特定的代謝通路，可對(duì)標(biāo)記的代謝物進(jìn)行流向分析。