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操作凝膠滲透色譜要注意哪些操作細(xì)節(jié)

來源：上海杜凱生物科技有限公司 2024年04月19日 10:54

　　凝膠滲透色譜，也稱為尺寸排阻色譜，是一種用于分離和分析高分子化合物(如聚合物)的分子量分布的液相色譜技術(shù)。在使用凝膠滲透色譜時(shí)，需要注意以下事項(xiàng)以確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性：

　　1. 樣品準(zhǔn)備：

　　- 確保樣品充分溶解在流動(dòng)相中，不溶或部分溶解的樣品會(huì)影響色譜峰的形狀和位置。

　　- 使用適當(dāng)?shù)娜軇?duì)樣品進(jìn)行過濾或離心，以去除可能存在的大顆粒或聚集體，這些雜質(zhì)可能會(huì)堵塞色譜柱。

　　- 根據(jù)需要對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，以避免過載和柱污染。

　　2. 色譜柱的選擇和維護(hù)：

　　- 根據(jù)樣品的分子量范圍選擇合適的色譜柱，不同的柱具有不同的分離范圍。

　　- 定期清洗和再生色譜柱，以去除吸附的雜質(zhì)和恢復(fù)柱效。

　　- 避免柱干涸，因?yàn)檫@會(huì)損壞固定相并影響分離效果。

　　3. 流動(dòng)相的選擇：

　　- 選擇與樣品兼容且不會(huì)對(duì)檢測(cè)器產(chǎn)生干擾的流動(dòng)相。

　　- 確保流動(dòng)相純凈無雜質(zhì)，以防止額外的色譜峰出現(xiàn)。

　　- 使用前對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行脫氣處理，以減少氣泡對(duì)流速和檢測(cè)的影響。

　　4. 系統(tǒng)溫度的控制：

　　- 保持恒定的柱溫，因?yàn)闇囟炔▌?dòng)會(huì)影響樣品的擴(kuò)散系數(shù)和相互作用，從而影響分離效果。

　　- 對(duì)于某些聚合物，可能需要控制較高的溫度以確保其充分溶解。

　　5. 檢測(cè)器的校準(zhǔn)：

　　- 定期校準(zhǔn)檢測(cè)器，以確保測(cè)量結(jié)果的準(zhǔn)確性。

　　- 如果使用折射率檢測(cè)器，需要確保流動(dòng)相與樣品有足夠的折光指數(shù)差異。

　　6. 標(biāo)準(zhǔn)品的使用：

　　- 使用已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行系統(tǒng)校準(zhǔn)，以建立可靠的校正曲線。

　　- 標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)與被測(cè)樣品具有相似的化學(xué)結(jié)構(gòu)和溶解行為。

　　7. 數(shù)據(jù)解析：

　　- 使用專業(yè)的軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，正確解讀色譜圖和分子量分布。

　　- 注意基線的穩(wěn)定性，基線的漂移可能會(huì)導(dǎo)致分子量分布的誤判。

　　8. 操作技巧：

　　- 在啟動(dòng)色譜系統(tǒng)之前，確保所有連接都緊固無漏，以防止流動(dòng)相泄漏。

　　- 避免快速改變流速或壓力，這可能會(huì)導(dǎo)致柱內(nèi)填料的不穩(wěn)定。

　　9. 安全措施：

　　- 使用有機(jī)溶劑作為流動(dòng)相時(shí)，應(yīng)注意通風(fēng)和防火安全。

　　- 遵守實(shí)驗(yàn)室的安全規(guī)程，佩戴適當(dāng)?shù)膫€(gè)人防護(hù)裝備。

　　10. 實(shí)驗(yàn)記錄：

　　- 詳細(xì)記錄實(shí)驗(yàn)條件、樣品信息、操作步驟等，以便于實(shí)驗(yàn)結(jié)果的復(fù)現(xiàn)和問題的追蹤。

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