首先是玻片的處理,普通的蓋玻片用砂輪劃成自己要的大小的小方塊,先用洗衣粉洗干凈,用水沖靜烤干,然后泡酸過夜,撈酸后流水洗凈,烤干,置于器皿中高壓滅菌,然后再烤箱中大約8小時烤干備用。
爬片可以在培養皿 六孔板或24孔板中都可,我選擇在培養皿中爬。一為節約經費(培養皿可以重復利用)二來覺得培養皿口大,操作比較方便。培養皿消毒同上,消毒時記得消兩把鑷子
具體操作是:用胰酶消化好細胞,充分吹打,使之成單細胞懸液(注意:這一點很重要,關系到將來爬出來片子的質量)
取出消毒的培養皿,可以先加少量培養基(以使玻片與培養皿緊密接觸),將玻片小心放入擺放其中,然后將單細胞懸液一滴一滴的滴到玻片上。最后蓋上培養皿置于37度5%CO2的暖箱中培養,根據細胞生長狀況,24小時或更長時間適時取出爬片。
爬片置于37度PBS中洗三次,每次3到5秒鐘,然后在4%多聚甲醛中固定15分鐘,然后再用37度去離子水將甲醛沖干凈,注意手法輕柔,要不然掉片很厲害。同時操作過程中注意玻片的正反面,要不然真的是前功盡棄。
將做好的爬片置于濾紙上晾干,然后用中性樹膠粘在載玻片上。注意一定要等中性樹膠干了之后才能做后續實驗,要不然玻片會掉下來的,就又是前功盡棄了 做好的細胞爬片可以放在-20保存備用,具體能保存多長時間不太清楚,當然盡量早用。
相關產品
免責聲明
- 凡本網注明“來源:化工儀器網”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網絡有限公司-化工儀器網合法擁有版權或有權使用的作品,未經本網授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經本網授權使用作品的,應在授權范圍內使用,并注明“來源:化工儀器網”。違反上述聲明者,本網將追究其相關法律責任。
- 本網轉載并注明自其他來源(非化工儀器網)的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網贊同其觀點和對其真實性負責,不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時,必須保留本網注明的作品第一來源,并自負版權等法律責任。
- 如涉及作品內容、版權等問題,請在作品發表之日起一周內與本網聯系,否則視為放棄相關權利。