細胞培養是每個實驗者都會使用的技術，但是細胞在培養過程中常受到許多不同來源的污染，如細菌、真菌、支原體和內毒素污染等等，其中支原體污染最難發現和處理。綜合FDA、ATCC等機構收集到的相關數據，世界各國細胞系支原體污染的平均比例為30-60%。它們不僅與宿主競爭營養，還會掩蓋一些化合物毒性影響，因此細胞受到支原體污染后不但會抑制生長和新陳代謝、改變DNA轉染效率，甚至最終會導致細胞死亡，嚴重影響實驗結果的可靠性、重復性及一致性，所以在實驗中定期做好支原體預防、檢測和清除極為關鍵。

支原體污染細胞狀態 圖片來源網絡

什么是支原體？

支原體模式圖 圖片引自David S. Goodsell手繪

支原體又稱霉形體，是目前發現最微小、能夠自我復制且不具有細胞壁的原核生物，直徑大小僅為50-300nm，可通過濾菌器； 支原體可分為口腔支原體、精氨酸支原體、豬鼻支原體、發酵支原體、人型支原體、唾液支原體、肺支原體和梨支原體等多種類型。

支原體污染對細胞的危害

●抑制細胞生長和新陳代謝；

●干擾核酸合成，染色體畸變；

●改變細胞膜抗原性，并可能改變DNA轉染效率；

●增加了對凋亡誘導物的敏感性；

●細胞死亡。

圖片引自Lonza

支原體污染來源

典型的支原體污染來源比較廣泛，通常包括以下幾種來源：

●未檢測細胞之間交叉污染；

●實驗室環境或實驗器材的直接污染；

●培養基或其他試劑污染；

●實驗人員無菌操作不當；

●制備細胞的組織或器官產生污染。

支原體污染的特性

一般細胞被支原體污染了幾個月都沒有被發現，支原體污染之所以很難檢測和預防，是因為其具有非常高的隱蔽性，具體如下：

●體積非常小，即使在支原體高濃度（>107 cfu/ml）下，顯微鏡下也不可見；

●相對于細菌污染，支原體污染不會引起渾濁或PH值改變等可見變化；

●大部分用于細胞常規培養的抗生素對支原體無效；

●常規的過濾也無法去除支原體。

如何預防支原體污染？

如何進行安全的細胞培養并預防支原體的污染呢？優寧維為大家總結了十個技巧：

●穿戴適當的個人防護設備(手套、專用的干凈實驗服、護目鏡)并消毒手套

●在細胞處理開始前以及處理不同細胞系之間擦拭安全柜中的工作桌面

●避免在你的細胞上說話或打噴嚏

●避免飛濺、溢出和氣溶膠

●為每個細胞系使用zhi定的培養基瓶

●定期清潔培養箱，包括水盤

●定期清空及清潔水浴設備

●細胞復蘇幾天后測試新細胞培養物的支原體污染

●隔離所有進入實驗室的細胞培養物,直到它們經過支原體檢測

●不要忘記：每2周進行一次支原體的常規檢測

如何檢測和清除支原體污染？

一般來說，新的細胞株都需要做支原體檢測，細胞培養期間，建議每1-2周進行一次支原體檢測以防止污染。因此，在實驗室的日常研究需求中，需要一種快速、全面的檢測方法以應對日常的檢測需求。

支原體檢測——Lonza MycoAlert™支原體快檢

1、檢測原理

目前，在95%支原體污染來自6個種屬，在這些種屬和大多數的柔膜細菌中，存在兩種酶，乙酸激酶和氨基甲酸激酶，MycoAlert™通過檢測兩種酶的活性，完成支原體檢測。僅需兩步簡單操作，20分鐘即可完成檢測。這兩種酶在真核細胞中不存在，因此，既可保證檢測的準確性，又可快速完成檢測。

2、檢測方法

3、數據解讀

4、產品優勢

1.只需兩步操作，20分鐘內出結果；

2.生物發光技術，無需抽提DNA；

3.MycoAle-t™ PLUS試劑盒可用于低敏板式發光儀或多功能發光儀上；

4.可檢測所有常規的支原體和甾原體的污染

5.可檢測44種柔膜菌綱（支原體）物種

6.適用于研究中細胞培養環境的篩選

7.適用于檢測新的培養基，水，添加物（如血清等）

支原體清除——Lonza MycoZap™支原體去除試劑

支原體無法通過無菌過濾去除。由于支原體沒有細胞壁，常規的細胞培養抗生素（如青霉素）對它也不起作用。多數情況實驗者丟棄已污染樣品。但是有時實驗者出于某些原因不能丟棄已污染的樣品，就可以通過MycoZap™支原體去除試劑在4天內清除支原體。挽救他們的樣品。

1、作用原理

它通過抗生素和抗代謝藥劑的共同作用來終止支原體。這種方法高效可靠的去除支原體，解決單獨的抗生素對支原體不起作用的問題。MycoZap™支原體試劑可清除細胞培養中的柔膜綱污染包括支原體、甾原體、螺原體、蟲原體。

2、使用方法

1.在25cm2的培養瓶中添加4.5 ml培養基（胎牛血清<5%）；

2.在培養基中加入500µl的MycoZap™ reagent 1，輕輕旋轉混合；

3.在培養基(含5% (v/v)胎牛血清)中制備細胞懸液，細胞密度為105個/ml；

4.向MycoZap™培養基混合液中加入5 ml細胞懸液；

5.根據細胞增殖速率，正常孵育2-6天；

6.在傳代之前，取2ml細胞培養上清液，用MycoAlert™試劑盒進行檢測；

7.將細胞正常傳代至9.5ml新鮮培養基中；

8.向細胞中加入500µl的MycoZap™ reagent 2；

9.檢測陰性后即可正常培養細胞。

3、產品優勢

1.全面、徹di的支原體去除試劑

●消滅支原體、甾原體、螺原體、蟲原體

●通過抗生素與抗代謝藥劑的聯合作用有效去除柔膜綱物種

2.有效而溫和

●細胞毒性最小化

●廣泛地適用于細胞培養

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