分析檢測中繪制標準曲線目的是可以根據(jù)標準曲線查出待測物質(zhì)的含量，所以標曲的制定是實驗室工作中必bi不可少的一環(huán)。那么問題來了，做標準曲線真的那么簡單嗎？您所做的標準曲線真的做好了嗎?導(dǎo)致標準曲線彎曲的原因是什么呢？RSD值、線性相關(guān)系數(shù)和線性方程如何？線性好與不好分別是由于哪些原因造成的？是儀器、標液，還是配制的問題？接下來恒遠生物為您揭曉答案！

一、前期測定時注意：

1.儀器校驗好。

2.移取液體體積要精確，保證迅速準確，盡可能用一根移液管；為減小人為所帶來的誤差，同一種液體需由同一個人操作；

3.保證標準品的純度，所用標準品最好是新打開的，純度較高的固體或溶液，防止污染；

4.容器要保證潔凈；

5.根據(jù)標準品理化性質(zhì)注意加樣的先后順序；

6.如果要測OD值，應(yīng)保證測前各管液體充分混勻；

7.若還是有某個點誤差較大，應(yīng)舍棄。

另外：

1.樣品的濃度等指標是根據(jù)標準曲線計算出來的，所以首先要把做標準曲線看作是比做正式實驗還要重要的一件事情，否則后面的實驗結(jié)果將無從談起。

2.設(shè)置標準曲線樣品的標準濃度范圍要有一個比較大的跨度，并且要能涵蓋你所要檢測實驗樣品的濃度，即樣品的濃度要在標準曲線濃度范圍之內(nèi)，包括上限和下限。而對于呈s型的標準曲線，盡量要使實驗樣品的濃度在中間坡度最陡段，即曲線幾乎成直線的范圍內(nèi)。

3.最好采用倍比稀釋法配制標準曲線中的標準樣品濃度，這樣能夠保證標準樣品的濃度不會出現(xiàn)較大的偏離。

4.檢測標準樣品時，應(yīng)按濃度遞增順序進行，以減少高濃度對低濃度的影響，提高準確性。

5.標準曲線的樣品數(shù)一般為7個點，但至少要保證有5個點。

6.做出的標準曲線相關(guān)系數(shù)因?qū)嶒炓蟛煌兴儎樱话銇碚f，相關(guān)系數(shù)r至少要大于0.98，對于有些實驗，至少要0.99甚至是0.999。

二、分光光度法繪制標準曲線所遇問題？

1.單色光純度不夠

問題：標準曲線上端向下彎曲。

措施：光度法中要求在最大吸收峰處測定吸光度，光度計的有效譜帶寬度越窄越好，有利于獲得純度高的單色光。

2.比色皿的厚度或光學性能不一致

如果裝試劑空白液的比色皿較其它比色皿薄或?qū)獾奈蘸头瓷渖僖恍瑒t曲線的延線與縱坐標相交；反之，與橫坐標相交。

3.顯色反應(yīng)和反應(yīng)條件的問題

當顯色反應(yīng)的靈敏度不高時，被測物低于某一濃度就不能顯色，當濃度不同時，溶液對光的吸收、散射的程度不同，低濃度段往往彎曲，加上濃度高時部分膠體顆粒的聚沉，致使測定的吸光度降低，曲線上端向下彎曲。

4.操作上的原因

問題：褪色反應(yīng)，顯色溶液的顏色不穩(wěn)定、易褪色，若比色時間超過了穩(wěn)定時間，標準系列中高濃度溶液顏色減褪，致使曲線上端向下彎曲。

措施：控制好顯色劑的加入時間，可以每加3份，停3～3min，再加上3份，依次進行，以使每支比色管的顯色時間相近。

5.干擾物質(zhì)的影響

標準曲線繪制完畢了，該如何檢驗？

標準曲線的檢驗是實際操作中最大的難點，也是工作中誤區(qū)和爭議最多的話題了！

先來了解下最重要的三大檢驗項目：

1.精密度檢驗

標準曲線的精密度檢驗：精密度檢驗就是看試驗點距離擬合的直線的距離有無異常，所以也稱線性檢驗（擬合檢驗），需用F檢驗，P<0.05作為線性檢驗合格的標準。

2.截距檢驗

3.斜率檢驗

標準曲線的截距檢驗和斜率檢驗分別考察Y=a+bX中a和b與0的統(tǒng)計學差異，a與0有差別說明有試劑空白或系統(tǒng)誤差，而b若與0沒差別說明儀器的靈敏度根本達不到分析要求。

標準曲線的檢驗應(yīng)該是線性檢驗結(jié)合失擬檢驗，以及殘差的正態(tài)性檢驗結(jié)合才是統(tǒng)計學上比較完備的。

要想繪制出合格的標準曲線、使用好標準曲線，實屬不易，所以必須將以上各個方面的條件都考慮進去，即對標準曲線的繪制也實行質(zhì)量控制，只有這樣, 才能得出理想的標準曲線。