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ELISA試驗陰性與陽性對照平均值計算與判斷

來源:上海撫生實業有限公司   2023年11月20日 15:22  

陰性與陽性對照平均值計算與判斷:  
1.陰性對照平均值NCx有效性計算判斷舉例:   
(1)第一類NCx計算與評價:以HBsAg為例
Ⅰ. 設置3孔的NCx計算:NCx=(0.011+0.010+0.090)/3=0.010  
Ⅱ. 任一個NC值應≤0.100至≥-0.010; 
Ⅲ. 各NC值也應介于≥0.5×NCx至≤1.5×NCx之間。此時各孔的NC值均處于NCx±0.006范圍內,其中遇有一孔NC值偏離該范圍時,則棄去該NC值,再計算NCx。如有2孔NC值超出該范圍時,本次試驗(無效)應予復試。   
Ⅳ. 不同廠牌對NCx的具體要求略有不同,但總的原則幾為一致,如<法>巴斯德HBsAg EIA Kit。 
(2)第二類NCx計算與評價:可包括抗—HBc、抗—HBe。以抗—HBc、抗—HBe為例: 
Ⅰ. 取3孔陰性對照A值的平均值: 
抗—HBc NCx=(1.027+0.989+1.278)/3=1.065  
抗—HBe NCx=(1.169+1.088+0.993)/3=1.083;   
請各位注意:這2個NCx是不是很接近1.00呀?也就是說,十分接近C.O.I.(C.O./S,或C.O./A)=1.00!這不是一種偶然,而是國際試劑(如雅培)的“質量”標志。如果偏大,例如1.50以上,或者偏小,0.50以下,待檢樣本中會導致出現什么現象呢?請讀者自己思考吧。 
Ⅱ. 各孔NC值均應<2.000,并處于≥0.5×NCx至≤1.5×NCx之間。若其中1孔NC值偏離該范圍時,棄去,再計算2孔的NC值的NCx。如有2孔NC值偏離該范圍時,應重新試驗。
2.陽性對照平均值PCx有效性計算與評價也分為兩類:   

(1)第一類 PCx計算與評價:以HBsAg為例 DauI*sZmR  
Ⅰ. 第一類PCx的計算不列入Cut off計算,可取(設)2—3孔陽性對照的平均值PCx(Abbott): PCx=(1.024+1.030)/2=1.027。注意:本例雅培試劑HBsAg的Cutoff值=NCx+0.05=0.06,PCx 的S/C.O.=1.027/0.06=17.12。如果S/C.O.超過20.00以上,提示HBsAg陽性對照含量太高!
Ⅱ. 參照方法學的要求,也可規定PCx應≥1.000(指A值),而且各孔PC值要求≥0.5×PCx 至≤1.5×PCx  
Ⅲ. PC的設置及PCx的計算,主要用于評價本次試驗結果是否有效和各批/次試驗結果的穩定性和可比性,并不參與Cut off值的計算。同一個批號試劑及其陽性對照品在規定保存條件和有效期內,各次試驗時PCx值也應保持相對穩定水平。換句話說,實驗結果有效性評價時,也應觀測陽性對照的“統計過程控制”(SPC)處于穩定狀態—輸出“控制圖”。 
(2)第二類PCx的計算與評價:也以抗—HBc為例 
Ⅰ. 可取(設)2—3孔PC 的A值得平均值PCx: PCx=(0.051+0.038)/2=0.045  
Ⅱ. 參照方法學要求,也可規定各孔PC值應處于≥0.5×PCx 至≤1.5×PCx范圍內。  
Ⅲ. PCx值參與Cut off值的計算,例如抗—HBc的Cut off(Abbott):  
Cut off=0.4(NCx)+0.6(PCx)。
該值(Cut off)可以理解為:指示性定量HBcAg反應值的40%加定量抗—HBc反應值的60%之和,恰為健康人群血中抗—HBc正常值范圍的界限。任一待檢樣本的檢出值低于該Cut off值時則判為抗—HBc陽性,大于該Cut off值時則判為抗—HBc陰性。


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