我們可以通過利用一些大分子量的顆粒提高生物層干涉技術(shù)（BLI）的檢測(cè)靈敏度。隨著人們對(duì)使用蛋白質(zhì)組裝功能材料的興趣日益增強(qiáng)，Sup35NM 淀粉樣蛋白原纖維因其理想的蛋白支架而備受關(guān)注。華南理工大學(xué)和萬孚的科學(xué)家們將 Z 結(jié)構(gòu)域（能與抗體Fc結(jié)合）與蛋白質(zhì) Sup35NM 融合，表達(dá)在大腸桿菌表面（功能化大腸桿菌），并與抗體形成復(fù)合物。這樣，BLI生物傳感器上的分析物上就加載了抗體偶聯(lián)的大腸桿菌細(xì)胞，光學(xué)厚度發(fā)生了顯著的變化，從而增強(qiáng)BLI信號(hào)。科學(xué)家們使用了兩種模型抗原 NS1 和 PIC，采用夾心法擴(kuò)增信號(hào)。在優(yōu)化條件下，NS1的檢出限從93.98 ng/mL降至0.82 ng/mL，PIC的信號(hào)也提高了8.4倍。研究結(jié)果表明，功能化大腸桿菌可快速且靈敏地放大生物傳感器的信號(hào)。

微生物胞外聚合物（EPS）可以與磺胺類藥物結(jié)合，這可能影響生物廢水處理系統(tǒng)中抗生素的去除效果。華東師范大學(xué)上海有機(jī)固廢生物轉(zhuǎn)化工程技術(shù)研究中心的科學(xué)家們利用Octet® 建立了一種測(cè)定EPS與磺胺類藥物（磺胺甲噁唑，SMX）結(jié)合動(dòng)力學(xué)和親和力的方法，該方法包括在各種環(huán)境條件（如pH值、離子強(qiáng)度和溫度）對(duì)這種結(jié)合相互作用的影響。結(jié)果表明，Octet® 能夠快速準(zhǔn)確地測(cè)定EPS與SMX相互作用的結(jié)合/解離速率常數(shù)和結(jié)合親和力。Octet® 結(jié)合曲線的高重現(xiàn)性證明了BLI方法的可靠。相比于中性或堿性條件下相比，EPS和SMX在酸性條件下的結(jié)合相互作用得到顯著改善。較高的離子強(qiáng)度和較低的溫度使EPS和SMX之間的結(jié)合更強(qiáng)。BLI分析允許同時(shí)進(jìn)行多通道操作，大大縮短了測(cè)試時(shí)間。本研究開發(fā)的BLI方法為探測(cè)復(fù)雜環(huán)境樣品之間的結(jié)合相互作用提供了強(qiáng)大的工具。

流感病毒表面蛋白血凝素（HA1）的球狀頭部結(jié)構(gòu)域是疫苗引發(fā)的中和抗體的主要靶標(biāo)。HA1上某些氨基酸殘基位點(diǎn)在與流感疫苗產(chǎn)生的多克隆血清抗體的結(jié)合中占主導(dǎo)地位。因此，鑒定HA的主要結(jié)合表位對(duì)于選擇季節(jié)性流感疫苗病毒至關(guān)重要。美國(guó)疾病預(yù)防控制中心開發(fā)了一種基于生物層干涉法（BLI）的測(cè)定法，使用（H1N1）pdm09病毒株的重組 HA1 蛋白來確定流感疫苗抗體反應(yīng)中的主要結(jié)合表位。他們合成并表達(dá)了一系列含有多個(gè)單個(gè)氨基酸HA1突變體庫，并用Octet®測(cè)試接種了2010 - 2011年流感三價(jià)疫苗的個(gè)體的血清與 HA1突變體庫的結(jié)合，并與血凝抑制（HI）實(shí)驗(yàn)進(jìn)行對(duì)比。結(jié)果顯示，與野生型相比，幾種突變型 HA1 的 BLI 結(jié)合信號(hào)減少了50%以上，并且 BLI 和 HI 測(cè)定存在很強(qiáng)的相關(guān)性。該研究展示了一種系統(tǒng)分析流感疫苗體液反應(yīng)中抗體免疫優(yōu)勢(shì)的方法。

Octet® 系統(tǒng)測(cè)試方法：將rHA1蛋白偶聯(lián)到HIS1K生物傳感器（專門捕獲his標(biāo)簽蛋白的傳感器，可再生！）中，然后結(jié)合免疫流感疫苗的血清。基線120秒、血清結(jié)合 300 秒和解離 120 秒。用結(jié)合步驟的BLI信號(hào)量化血清抗體與重組蛋白的結(jié)合能力。結(jié)果與野生型（WT）rHA1 結(jié)合的百分比表示，如果結(jié)合信號(hào)減少 ≥50%，則認(rèn)為該氨基酸位點(diǎn)為抗血清結(jié)合位點(diǎn)。

-參考文獻(xiàn)-

[1] Escherichia coli surface-displayed by Sup35NM nanofibrils and Z-domainsfusion protein for signal enhancement in a biolayer interferometry-based immunoassay. Sensors and Actuators: B. Chemical 390 (2023) 133938

[2] Multichannel Biolayer Interferometry to Probe the Binding ofMicrobial Extracellular Polymeric Substances to Sulfamethoxazole. ACS EST Water 2023, 3, 2449−2457

[3] Use of Biolayer Interferometry to Identify Dominant Binding Epitopes of Influenza Hemagglutinin Protein of A(H1N1)pdm09 in the Antibody Response to 2010–2011 Influenza Seasonal Vaccine. Vaccines 2023, 11, 1307.