Q1: 什么是內毒素？

A1: 內毒素是一種復雜的脂多糖（LPS），存在于大多數致病性革蘭氏陰性細菌的外膜上。雖然煮沸 30 分鐘不會破壞內毒素的穩定性，但某些強氧化劑（如超氧化物、過氧化物和次氯酸鹽）可以降解內毒素。

Q2: 可接受的最大內毒素劑量是多少？

A2: 1 EU 大約相當于 100 pg 的大腸桿菌脂多糖--大約 105 個細菌中的含量。人類只要接觸到5 EU/1kg 的內毒素，就會出現癥狀。這些癥狀包括但不限于發燒、低血壓、心率加快和尿量少。即使血液中含有小劑量的內毒素，也往往是致命的。

FDA對在美國銷售的藥品規定了以下最高允許內毒素含量：

1.藥物（可注射，鞘內注射）- 0.2 EU/1kg體重

2.藥物（可注射，非鞘內注射）--5 EU/1kg體重

3.無菌水 - 0.25-0.5 EU/ml（取決于預期用途）

Q3: 我應該選擇哪種內毒素檢測方法？

A3: 在決定使用哪種內毒素檢測試劑盒之前，您需要考慮幾個問題。首先，您要檢測多少樣本，檢測頻率如何？如果您只檢測一兩個樣品，而且只檢測一次，那么您可以考慮內毒素檢測服務機構。如果您計劃定期檢測，那么您首先需要評估您目前擁有的設備。如果您有多種可用設備，請考慮您希望獲得的結果類型。如果您必須獲得定量結果，那么凝膠法試劑盒將無法滿足您的需求，因為凝膠法檢測只能得出定性的結果。檢測靈敏度是另一個重要的考慮因素。Kinetic-QCL™ 動態顯色 LAL 檢測法和 PyroGene™ 重組因子 C 檢測法的靈敏度都可低至 0.005 EU/mL。PYROGENT™-5000動態濁度LAL測定的讀數可達0.01 EU/mL。PYROGENT™凝膠法檢測試劑盒可訂購不同靈敏度的產品： 0.03、0.06、0.125 和 0.25 EU/mL。如果您需要經常檢測許多樣品，那么您可能需要考慮購買尚未擁有的設備和軟件。與PYROGENT™凝膠法相比，光度法和重組C因子法所需的上手操作時間更短，靈敏度更高。

Q4: 進行 Lonza 細菌內毒素檢測 (BET)、LAL 或 PyroGene™ 重組因子 C (rFC) 內毒素檢測需要哪些設備？

A4: 不同的內毒素檢測方法需要使用的設備可能也不同。如果使用PYROGENT™ 凝膠法檢測，需要一個非循環水浴鍋或一個能在 37°C 下加熱的干熱塊。如果Kinetic-QCL™ 或 PYROGENT™-5000檢測，則需要吸光度酶標儀和內毒素檢測分析軟件，該酶標儀應具有振蕩功能，能在 37°C 下孵育整個檢測過程，并能在 405 nm（用于 Kinetic-QCL）或 340 nm（用于 PYROGENT™-5000）波長下讀取動力學數據。如果使用PyroGene™ rFC 檢測，則需要使用配有 380/440 nm濾光片的孵育熒光酶標儀。我們的所有試劑盒都需要使用漩渦混合器和標準實驗室移液器。

Q5: 在進行 Lonza 細菌內毒素檢測 (BET)、LAL 或 PyroGene™ 重組因子 C (rFC) 內毒素檢測試驗時，為什么要使用玻璃配件而不是塑料？

A5: 內毒素在塑料表面的附著力比玻璃表面強。因此，我們建議在配制內毒素對照標準（CSE）稀釋液時使用硼硅酸鹽玻璃稀釋管。在某些情況下，某些塑料可能被證明是可以接受的樣品容器。雖然玻璃仍是樣品容器材料，但聚苯乙烯可能是第二選擇，聚丙烯則是第三選擇。一些客戶也表示使用 PET 材料效果不錯。如果您計劃在檢測前將樣品保存一段時間，則應驗證樣品是否能在您計劃使用的容器中保存，并確認樣品中的任何內毒素在保存后都能被回收。

Q6: 在使用 Lonza 細菌內毒素檢測試劑盒 (BET)、LAL 或 PyroGene™ 重組因子 C (rFC) 進行內毒素檢測時，為什么要對標準內毒素 (CSE) 對照稀釋液進行渦旋處理？

A6: 內毒素會附著在玻璃表面，可以通過適當的渦旋來復溶，以確保等分到反應管或微孔板中的溶液濃度正確。在稀釋之前，應將CSE小瓶渦旋15 分鐘。每次使用小瓶時都應重復此操作，而不僅僅是在復溶后。每次使用 CSE 稀釋液前應至少渦旋 1 分鐘。使用前最好立即將 CSE 稀釋液渦旋幾秒鐘。

Q7: 進行 Lonza 細菌內毒素檢測 (BET)、LAL 或 PyroGene™ 重組因子 C (rFC) 內毒素檢測時，如何將 EU/ml（內毒素單位）轉換為 ng/ml？

A7: 根據內毒素來源的不同，從EU/ml到納克的換算也會有所不同。FDA最初將內毒素單位(EU)定義為參考內毒素標準EC-2中0.2 ng或5 EU/ng的內毒素活性。將現行FDA RSE, EC-6從EU轉換為ng，轉換量為10 EU/ng。以前版本的BET<85>USP中規定，合適的CSE效價在2至50 EU/ng之間。

Q8: 在進行 Lonza 細菌內毒素檢測 (BET)、LAL 或 PyroGene™ 重組因子 C (rFC) 內毒素檢測試驗時，是否應該使用匹配的試劑、CSE？

A8: 您需要使用匹配的試劑，以符合 FDA 對內毒素檢測的要求。龍沙的每批 LAL 都使用標準 EC-6 進行功能測試。然后，通過與參考標準內毒素（RSE）平行測試，將該批次 LAL 與我們的對照標準內毒素（CSE）進行 "匹配"。這種 RSE/CSE 相關性檢測可確定該批次 CSE 與該批次 LAL 一起使用時的效力。RSE/CSE 相關性測定的程序摘自美國食品及藥物管理局（FDA）關于將嗜酸性卵母細胞裂解物檢測法確認為人和動物腸外藥品、生物制品和醫療器械最終產品內毒素檢測法的指導原則。FDA 指出，使用 LAL 生產商出具的質量證書，企業就無需自行進行 RSE/CSE 比對。龍沙提供的試劑盒包含適用于我們所有檢測類型的匹配試劑，使您的內毒素檢測更簡單。

Q9: 準備運行 Lonza 細菌內毒素檢測試劑盒 (BET)、LAL 或 PyroGene™ 重組因子 C (rFC) 時，如何確定 CSE 的效力？

A9: 龍沙確定 CSE 效力的 RSE/CSE操作見每種匹配試劑盒的CoA。一般來說，將多瓶 CSE 的內毒素稀釋液與用 RSE 生產的一系列標準品進行未知物測試。將 CSE 稀釋液的結果與 RSE 的結果進行比較計算，得出以 EU/ml 為單位的效力。對于凝膠法，終點的稀釋倍數的幾何平均數乘以靈敏度，即可確定以 EU/ml 為單位的效價。對于定量方法，對結果在所測 RSE 標準曲線范圍內的稀釋液進行平均，以確定以 EU/ml 為單位的效價。要計算每納克的效價，效價要乘以復溶CSE 所用的體積（例如 5 ml）和每個小瓶中凍干的相應ng內毒素。得出 EU/ng。

Q10: 在進行 Lonza 細菌內毒素檢測 (BET)、LAL 或 PyroGene™ 重組因子 C (rFC) 內毒素檢測試驗時，應該如何處理 LAL 試劑？

A10: LAL 試劑應輕拿輕放。復溶后，輕輕倒置或旋轉試劑瓶，試劑瓶中的內容物很容易溶解。渦旋或劇烈搖晃重組的 LAL 試劑會使其起泡，不利于內毒素檢測。