S100B蛋白酶免ELISA試劑盒
德國DRG*,貨號:EIA5169
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預期用途
此試劑盒用于人血清和血漿中S100B濃度的檢測,僅用于實驗室
實驗原理
此試劑盒基于兩抗體與S100B結合,一個抗體固定在包被板上,另外一個則被HRP標記。試驗基于兩步法,每次洗板后,結合的和游離的就會分離,底物液TMB加入,會發生顏色變化,終止液加入終止反應,吸收值檢測。樣品中的S100B的濃度計算可從標準品著手。顏色強度與樣品中的S100B的濃度成正比
試劑盒組成
1. S100B標準品,6支,凍干粉,STD0-STD5
2. 質控品,2支,凍干粉,陰性質控和陽性質控
3. 酶聯物緩沖液,1支,20ml,Tris緩沖液,BSA10g/L,0.05%吐溫
4. 酶聯物,1支,1ml,HRP標記的抗S100B
5. 試驗緩沖液,1支,12ml,Tris緩沖液,BSA10g/L,穩定劑
6. 包被板,可拆,包被有抗S100B
7. TMB底物液,1支,15ml,H2O2-TMB 0.25g/L,避免皮膚接觸
8. 終止液,1支,15ml,0.15mol/L硫酸,避免皮膚接觸
9. 洗滌濃縮液,50X,1支,20ml,NaCl 45g/L,吐溫20 55g/L
實驗所需但試劑盒未提供
1. 去離子水
2. 自動移液器
3. 酶標儀
注意:所有試劑應保存在黑暗處2-8℃,微孔板平衡至室溫方可打開包裝,使用完后立即密封,不要移去未用板條的粘合條
注意事項
1. 試劑內含有硫柳汞防腐劑
2. 配制和吸取試劑時應按zui高度要求操作
3. 所有試劑都有各自的批號,不要混用不同批次內的物質
4. S100B的檢測范圍為10-5000pg/ml
5. 標準品的具體濃度見瓶上標簽
6. 不要使用嚴重溶血樣品
7. 避免底物液暴露在陽光,金屬或氧化劑下
操作步驟
樣品準備
S100B檢測可使用人血清或血漿,不要使用溶血樣品,樣品可在2-8℃下保存1天,更長的保質期的話可放置在-20℃,避免反復凍融,不要將樣品放置在室溫下的時間過長,樣品濃度高于5ng/ml時,應用試驗緩沖液進一步稀釋
標準品和質控品的準備
用1ml的去離子水配制標準品和質控品,可保存于2-8℃下4周,-20℃6個月,建議分裝保存于-20℃。標準品濃度見標簽。避免反復凍融和長時間暴露在室溫下
酶聯物的準備
使用前2小時準備
50ul的酶聯物+1.0ml的酶聯緩沖液(稀釋的酶聯物的量與試驗樣本量成正比),混合5min,避免氣泡產生,室溫下(22-28℃)可保存3小時
洗滌液準備
10ml的洗滌濃縮液+490ml的去離子水;不同的體積但保持同一稀釋比例;室溫下(22-28℃)可保存至標簽上所示的有效期
實驗步驟
建議做雙份檢測,包括標準品,質控品和樣品,還有一個空白對照孔
試劑 | 標準品 | 樣品/質控 | 空白對照 |
標準品S0-S5 質控 | 50ul | | |
樣品/質控 | | 50ul | |
試驗緩沖液 | 50ul | 50ul | |
室溫下孵育2小時,棄去孵育液,每孔加300ul的洗滌液洗板6次 | |||
稀釋的酶聯物 | 100ul | 100ul | |
室溫下孵育1小時,棄去孵育液,每孔加300ul的洗滌液洗板6次 | |||
TMB底物液 | 100ul | 100ul | 100ul |
黑暗處,室溫下孵育30min | |||
終止液 | 100ul | 100ul | 100ul |
輕輕搖動微孔板,酶標儀上讀數(450nm) |
結果計算
1. 計算每一標準品和樣品的平均OD值
2. 以標準品吸收值和濃度繪制一zui合適的標準曲線(三次回歸或四參數)
3. 從標準曲線上可直接讀取樣品濃度
本譯文僅供參考,詳情請以原文為準。
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