原理：

1. 當(dāng)溫度低至-70℃時(shí)，細(xì)胞內(nèi)的酶活性全部停止，代謝活動(dòng)停止，故實(shí)現(xiàn)長期保存的目的。

2. 隨著溫度降低，細(xì)胞內(nèi)外的水分都會(huì)結(jié)晶，所形成的冰晶會(huì)造成細(xì)胞膜和細(xì)胞器的破壞，從而引起細(xì)胞死亡，特別是0~-20℃的階段，冰晶呈針狀，及其引發(fā)細(xì)胞損傷。在不加任何保護(hù)劑條件下直接凍存細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞內(nèi)和外環(huán)境中的水都會(huì)形成冰晶，能導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)發(fā)生機(jī)械損傷、電解質(zhì)升高、滲透壓改變、脫水、pH改變、蛋白變性等，能引起細(xì)胞死亡。

3. 常見的冷凍保護(hù)劑是甘油或二甲基亞砜（DMSO）。DMSO能快速穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞，降低冰點(diǎn)，延緩凍存過程，同時(shí)增加細(xì)胞膜的通透性，提高細(xì)胞內(nèi)離子濃度，減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而達(dá)到保護(hù)細(xì)胞的目的。

注意事項(xiàng)：

1、從增殖期到形成致密的單層細(xì)胞以前的培養(yǎng)細(xì)胞都可以用于凍存，但**為對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞。在凍存前一天**換一次培養(yǎng)液;

2、將凍存管放入液氮灌或從中取出時(shí)，要做好防護(hù)工作，以免凍傷;

3、凍存和復(fù)蘇**用新配制的培養(yǎng)液。

4、取細(xì)胞的過程中注意帶好防凍手套，護(hù)目鏡。此項(xiàng)特別重要，細(xì)胞凍存管可能漏入液氮，解凍時(shí)凍存管中的氣溫急劇上升，可導(dǎo)致爆炸。