無菌條件下取新生一天的SD大鼠背根神經節。
鏡下去除神經根和外膜,放入1ml 0.1%膠原酶中37℃消化30min,每5min搖勻一次。
洗去膠原酶,吹打分散后,接種于預先涂有L-多聚賴氨酸的96孔培養板中,每孔含100μl無血清L15培養基,細胞約800個。
實驗組分別加入純化的表達蛋白(分別以不同的蛋白濃度),陰性對照加入等體積表達蛋白的溶劑。
37℃ 5%CO2培養48hr后,每孔加入10μl MTT,37℃ 5%CO2孵育4hr。
加入100μl 20%的SDS處理液,37℃孵育20hr。
用EL×800微孔酶標儀測定OD570值,數據分析。
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