1.熒光原位雜交概念

熒光原位雜交（Fluorescence in situ hybridization FISH）是一種非放射性原位雜交技術，同時也是一種新型的分子生物學與細胞遺傳學相結合的技術。熒光原位雜交技術是利用熒光檢測系統對DNA進行定性、定量或相對定位分析的技術，其基本原理是根據DNA序列的互補性，用已知的熒光素、生物素標記的核酸探針與待檢測樣本的DNA進行雜交，形成可檢測的雙鏈核酸雜交。

2.熒光原位雜交探針標記方法

熒光原位雜交探針的熒光標記有兩種方法。間接標記法是用生物素標記DNA探針，直接標記法是將熒光素與探針核苷酸或磷酸戊糖骨架直接結合。直接標記法檢測步驟簡單，但靈敏度不如間接標記法，因為信號不能放大。

3.熒光原位雜交探針類型

（1）雙鏈DNA探針， 目前應用廣泛，簡便易行，不易降解，一旦克隆成功，就可運用相同的擴增和標記程序獲得大量的標記探針

（2）單鏈DNA（ssDNA）探針，穩定，更易于使用，更具特異性對RNase具有抗性，更好的組織滲透性，無自我雜交

（3）RNA探針（核糖體探針），更高的熱穩定性，更好的組織穿透力，特異性更高，RNase的影響更小

（4）合成寡核苷酸，經濟、穩定、特異性強，對RNase具有抗性，組織滲透性好，重現性好

4.熒光原位雜交技術優勢

熒光原位雜交法具有其他雜交方法沒有的優勢：

（1）FISH是非放射性元素標記，更加安全；

（2）FISH的實驗周期短，可同時檢測多種序列；

（3）FISH技術因其多次免疫化學反應增強了雜交信號，靈敏度與放射性探針相當 。

5.熒光原位雜交應用

熒光原位雜交技術廣泛應用于基因表達分析、染色體結構和數目異常檢測、癌癥的快速臨床診斷、人類產前診斷等領域，有著非常重要的應用價值。

6.卡梅德生物能夠為客戶提供高質量的熒光原位雜交服務

卡梅德生物（KMD Bioscience）致力于細胞生物學研究多年，擁有經驗豐富的熒光原位雜交（fluorescence in situ hybridization，FISH）技術服務人才，搭建了完備的FISH技術服務平臺，我們能夠提供包括從探針設計、樣本處理、雜交檢測、基因表達研究到數據分析等一站式FISH技術服務，擁有規范和標準的檢測程序，從而保證實驗結果的準確性，降低了假陽性和假陰性。卡梅德生物同時可定制合成多種類探針，包括大部分植物、動物、微生物，定制的探針大于150kb，特異性強，出錯率低；利用熒光原位雜交技術，卡梅德生物還可以提供單克隆源性鑒定服務。

7.熒光原位雜服務交流程介紹

卡梅德生物可以提供熒光原位雜交服務，主要技術流程如下：探針設計與合成，樣本處理，原位雜交實驗，成像拍照，結果分析與項目報告。

7.1探針設計和合成

7.1.1即用型探針可以直接雜交，非即用型探針需要與與雜交液按 1：1：1：50 比例稀釋，85℃變性 3 分鐘，37℃平衡 5 分鐘。

7.2樣本處理

7.2.1脫蠟復水，將石蠟切片浸入二甲苯中脫蠟，2 次，每次 10 分鐘；

7.2.2片子依次過乙醇、85%、75%乙醇，各 3 分鐘，PBS 3 分鐘；

7.2.3 片子加胃蛋白酶消化液，37℃消化 15-30 分鐘，PBS 洗滌 2 次，每次 3 分鐘；

7.2.4預雜交：提前 30 分鐘從冰箱中取出雜交液恢復至室溫，滴加雜交液，雜交 儀中 55℃孵育 1 小時。

7.3原位雜交實驗

7.3.1取出預雜交好的片子，去除多余液體，將探針滴加于片子上，覆蓋組織， 放于雜交儀中 37℃雜交過夜；  

7.3.2片子入 2×SSC（0.1％NP-40）中洗滌 3 次，每次 5 min；

7.3.3 滴加 20ul DAPI-Antifade Solution 蓋玻片封片，避光孵育 20min。

7.4成像拍照

卡梅德生物不同樣本熒光原位雜交實驗結果拍照：

7.5結果分析與項目報告

卡梅德生物交付：剩余的探針、切片以及樣品，原始雜交顯色成像照片，詳細的實驗報告（包含完整的實驗流程及結果分析）。

卡梅德生物的技術專家將提供專業的一對一的定制化方案以及不同種屬樣本的檢測，從探針設計、染色體/細胞/細菌制備/培養到結果呈現的全套定制熒光原位雜交（FISH）服務，交付完整的實驗報告和拍照圖片。