在細(xì)胞培養(yǎng)中，如何凍存細(xì)胞

來源：浙江聯(lián)碩生物科技有限公司 2023年04月25日 16:31

操作步驟：

1.用移液器吸走原培養(yǎng)基，加入適量PBS洗1-2遍；

2.加入適量胰酶，置于培養(yǎng)箱中消化；

3.待消化到位后加入適量血清或培養(yǎng)基終止消化，800-1000rpm離心3-5min；

4.配制凍存液，待細(xì)胞離心后去上清，加入凍存液重懸，轉(zhuǎn)移到凍存管中；

5.將凍存管放入程序降溫盒中，-80度過夜，然后轉(zhuǎn)移到液氮中保存。

注意細(xì)節(jié)：

1.凍存步驟中包含了消化的大部分步驟，注意細(xì)節(jié)相同

2.凍存液常規(guī)配比為培養(yǎng)基：血清：DMSO=7:2:1，如果細(xì)胞比較珍貴，可以調(diào)整為血清：DMSO=9:1；

3.如果沒有程序降溫盒，可以將凍存細(xì)胞依次放于4度1h，-20度2h，-80過夜，大部分細(xì)胞也可以適應(yīng)，但原代細(xì)胞不建議這么處理；

4.凍存細(xì)胞儲(chǔ)存在-80度中通常不建議超過半年，液氮中通常不建議超過2年；

5.細(xì)胞如果是第一次養(yǎng)，建議至少凍存兩個(gè)批次以上，以盡量避免因?yàn)閮龃鎲栴}導(dǎo)致細(xì)胞絕種；

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