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高效液相色譜儀(HPLC)是應(yīng)用高效液相色譜原理，主要用于分析高沸點不易揮發(fā)的、受熱不穩(wěn)定的和分子量大的有機化合物的儀器設(shè)備。它由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱(固定相) 內(nèi)，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中做相對運動時，經(jīng)過反復多次的吸附- 解吸的分配過程，各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。HPLC廣泛應(yīng)用于生命科學、食品科學、藥物研究以及環(huán)境研究中。
高效液相色譜儀的校正是通過分析制備的標準樣品來確定計算絕對組分濃度的響應(yīng)系數(shù)的過程。
1.外標法：外標法是在空白樣品中加入一定量的標準物質(zhì)作為對照樣品，與未知樣品同時進行樣品處理和檢測，并計算出被檢測成分的濃度的定量方法。根據(jù)對照品響應(yīng)值與標準品濃度函數(shù)的關(guān)系，測定未知試樣中的成分。
2.內(nèi)標法：內(nèi)標法是將一定重量的純物質(zhì)作為內(nèi)標物加入一定量的被測樣品混合物中，對含有內(nèi)標物的樣品進行高效液相色譜儀分析，測定峰面積和相對含量。分別測定內(nèi)標物和受試物的有效校正系數(shù)，并按公式計算受試物的含量。
兩種適合的數(shù)據(jù)處理方法的差別為高效液相色譜儀：內(nèi)部標準方法是將標準的標準物質(zhì)作為要求的內(nèi)部條件，并以合適的操作條件對樣品進行嚴格的試驗和試驗結(jié)果的檢驗，但對樣品的準確操作條件和試驗結(jié)果的分析必須是嚴格的，而對樣品的內(nèi)部標準則不需要對樣品進行嚴格的校正。
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