PI細胞周期指細胞一個世代所經歷的時間。從一次細胞分裂結束到下一次分裂結束為一個周期。細胞周期反應了細胞增殖速度。細胞周期是一個重要的檢測參數,研究細胞周期變化的影響對于腫瘤的發展及藥物研發有著重要的作用。例如,已知抑制有絲分裂的化合物大都用來減緩腫瘤細胞的生長。
PI細胞周期檢測步驟:
1.細胞樣品的準備:
收集細胞,用1ml預冷PBS洗1遍,輕輕彈擊離心管底以適當分散細胞,避免細胞成團。
2.細胞固定:
加入1ml預冷的70%乙醇中,輕輕吹打混勻,4度固定2小時或更長時間(固定12-24小時可能效果更佳)。1000g離心3-5分鐘,沉淀細胞(如果細胞沉淀不充分,可以適當延長離心時間或加大離心力)。棄上清,用用1ml預冷PBS洗1遍。
3.PI染色:
每個樣品用0.5ml染色緩沖液(或PBS)重懸,加入25ulPI染色液(20×)、10ulRNaseA(50×)。37度避光溫浴30分鐘。
4.流式檢測:
用流式細胞儀在激發波長488nm波長處檢測紅色熒光,同時檢測光散射情況。采用分析軟件進行細胞DNA含量分析和光散射分析。
PI細胞周期可能有四種命運:
①細胞經M期又開始第二次周期;
②停止于G2期,稱為G2期細胞(R2),它受某種刺激后可進入周期;
③停止在G1期,稱為休止細胞或G0期細胞,這類細胞受某種刺激后仍能進入周期,繼續進行有絲分裂;
④喪失生命力近于死亡的細胞,稱為丟失細胞,或稱不再分裂的細胞。繼續分裂的細胞沿著細胞周期從一個有絲分裂期到下一個分裂期。不再分裂的細胞離開了細胞周期不再分裂,終死亡。
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