二維梯度PCR其實就是將多個的PCR反應放在一起做,不用一次一次的作很多次,溫度梯度PCR可以很快的找出適合的退火溫度,或者說可以在適合的退火溫度下擴增出目的條帶。除具標準PCR儀功能外,其梯度模塊還能同時進行多達12個不同退火溫度的PCR反應,在梯度模塊上,可實現對梯度溫度和梯度寬度等參數的調整,自由編程12道溫度,梯度實現不同樣品的退火溫度并同時進行熱循環。僅一次實驗就能確定特定體系相應的退火溫度。從而可在短時間內對PCR實驗進行優化,大大提高PCR科研效率。
二維梯度PCR實驗操作注意事項:
1.戴一次性手套,若不小心濺上反應液,立即更換手套;
2.使用一次性吸頭,嚴禁與PCR產物分析室的吸頭混用,吸頭不要長時間暴露于空氣中,避免氣溶膠的污染;
3.避免反應液飛濺,打開反應管時為避免此種情況,開蓋前稍離心收集液體于管底。若不小心濺到手套或桌面上,應立刻更換手套并用稀酸擦拭桌面;
4.操作多份樣品時,制備反應混合液,先將dNTP、緩沖液、引物和酶混合好,然后分裝,這樣即可以減少操作,避免污染,又可以增加反應的準確度;
5.加入反應模板,加入后蓋緊反應管;
6.操作時設立陰陽性對照和空白對照,即可驗證PCR反應的可靠性,又可以協助判斷擴增系統的可信性;
7.盡可能用可替換或可高壓處理的加樣器,由于加樣器容易受產物氣溶膠或標本DNA的污染,建議使用可替換或高壓處理的加樣器。如沒有這種特殊的加樣器,至少PCR操作過程中加樣器應該專用,不能交叉使用,尤其是PCR產物分析所用加樣器不能拿到其它兩個區;
8.重復實驗,驗證結果,慎下結論。
二維梯度PCR應用領域:分子生物學、醫學、食品工業、司法科學、生物技術、環境科學、微生物學、臨床診斷、流行病學、遺傳學、基因芯片、基因檢測、基因克隆、基因表達等領域以聚合酶鏈式反應(Picymerase Chain Reaction,PCR)為特征的、以檢測DNA/RNA為目的的各種病原體檢測及基因分析。
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